现代科技综述知识文库：细胞固定化的方法及应用.pdf

现代科技综述系列—— 细细胞胞固固定定化化的的方方法法及及 应应用用 科技是人类区别于动物的重要文明之一， 是人类对自然规律研究 利用的学科。 本文提供对科技基本概念 “细胞固定化的方法及应用” 的解读，以供大家了解。 细细胞胞固固定定化化的的方方法法及及 应应用用 传统的悬浮法细胞培养成本昂贵，效率较低，已不能 满足DNA体外重组与基因克隆技术发展的需要；固定 化酶技术则由于酶本身作为蛋白质容易变性，限制了 进行生物化学的研究。 细胞固定化技术是细胞悬浮培养技术 固定化酶技术 结合的革新，自20世纪70年代末以已醇发酵及藻类细 胞固定培养为先导，得到分子生物学家 生物化学家 的广泛重视，并已发展成为一种得到广泛应用的生物 技术。 近年来，细胞代谢途径及次生代谢产物生产、藻类细 胞壁多糖作为固定代基质、基因重组后的细胞固定培 养已成为细胞固定化技术研究的3个热点。 Radovich(1985)将细胞固定化技术按细胞与载体的相互 作用关系分为4种： (1)无载体固定化。 通过絮凝剂如阳离子、阴离子聚电解质、矿物质胶体 等的作用使细胞聚集。 严格地说，这种方法不能称为固定化技术。 (2)共价偶合。 通过交联剂的作用，使细胞连接到交联接次基上。 (3)吸附。 通常是表面多孔性惰性载体引起细胞的附着。 (4)包埋。 以水凝胶或膜作为半透性惰性物质能允许底物的流动 而限制了细胞的流动性，利用多孔性纤维质如纤维素 可以使细胞渗透进入孔隙内部，也能达到固定化目 的，这是包埋的一种特殊形式。 C ．D ．Scot认为，以上4种固定化方式可以归纳为两大 类：附着与包埋。 划分的标准是附着细胞直接与底物接蟹，受外界环境 影响较大，而包埋使细胞受到了更大的空间限制。 细胞附着不是简单的热力学吸附，故不能以Lan muir 等温式来描述。 Durand(1981) 的研究结果表明：细胞的附着能力与细胞 培养的年龄及细胞表面的t 电位有关。 某些生物有机体必须与其他的有机体发生共生作用才 能附着，或者需要通过离子间引力或化学键作用改变 其表面的物理化学性质才能产生附着的效应。 包埋是目前使用的最广泛的细胞固定化方法，按照固 定化基质材料的不同可以分为3类：凝胶、膜 多孔纤 维。 固定化机理研究有以下几方面。 (1)生物膜动力学：根据Donnan平衡原理，半透膜使细 胞与大量溶液分离。 这些被包埋在膜内的细胞分泌的粘多糖类聚合物起到 了胶水的作用，使细胞对膜表面产生吸引，从而使细 胞牢固地吸附。 继续分泌产生的物质与膜表面的相互作用形成生物 膜。 KSu a应用旋转盘接触器得出了最佳膜厚度模型。 (2)质量转移：包埋载体的孔径应大于底物 产物的直 径而小于细胞直径。 这样才能保证底物、产物的自由扩散而防止细胞的流 失。 J ．L ．Iborra(1986)通过酶动力学方程的微积分推导表 明：影响固定化细胞效率的决定因素是扩散速度 底 物浓度。 Damkohler Thieie模型为选择合适的固定化载体提供了 数学理论基础。 (3)细胞形态与物理化学环境因子：细胞形态是细胞生 存 生长的状态指数，反映了固定化细胞的生产效 率。 运用光电显微镜可以监测细胞的浓度，细胞在凝胶株 孔穴内繁殖，特别是靠近凝胶珠表面处，直到充满整 个网络间隙，物理化学环境因子是指光照、温度、盐 度、pH值、Po2 ／Pco2 、水活度、营养盐浓度等。 这些因素不仅影响细胞的发育生长，而且会引起细胞 主要代谢途径的改变。 细胞固定化的重要特征是提高了细胞的密度，为细胞 生长提供了单一稳定的环境，并且保持了活性细胞的 酶活性。 附着固定技术容易造成细胞流失，虽然加入Al3+