紫外光度法测定维生素c实验报告.pdfVIP

紫外分光光度法测定维生素C片维生素C的含量 一、实验目的 1.学习利用紫外吸收光谱测定物质含量的原理和方法； 2.熟练紫外-可见分光光度计的操作。 二、实验原理 维生素 C （VC）是一种酸性己糖衍生物，具有烯醇式己糖内酯立 体结构，分 D 和 L 两种立体构型，但只有 L 型有生理功效。维生素 C 具有较强的还原性,在一定条件下氧化型和还原型可以互 ,两者均 具有生物活性(结构式见图 1),其 C2 和 C3 位上两个相邻的烯醇式羟基 + 极易解离而释放出 H ,故维生素 C 虽然不含自由羧基，仍具有有机酸 的性质。维生素 C 呈无色无臭的片状结晶体,易溶于水,不溶于脂。在 酸性环境中稳定,遇空气中氧、热、光、碱性物质,特别是有氧化酶及痕 量铜、铁等金属离子存在时可促进其破坏速度。 具有π 电子的共轭双键化合物、芳香烃化合物等，在紫外光谱区 4 6 都有强烈吸收，其摩尔吸收系数 k 可达 10 -10 数量级。利用紫外吸收 光谱进行定量分析，要借助朗伯-比尔定律。根据维生素 C 在稀硫酸溶 液（维生素 C 水溶液在 pH 5 ～ 6 之间稳定）中，在 245 nm 波长处有最 大吸收的特性，建立了紫外分光光度法测定维生素 C 片含量的方法。 三、实验仪器及试剂 实验仪器：容量瓶（100 ml、1000 ml）、移液管（0.5 ml、5 ml）、烧杯、紫外分光光度计 实验用品：98%浓硫酸（分析纯，1.84 g/ml）、维生素 C 对 照品系以原料药经 105 干燥至恒重（含量为 99.7 %）、维生 素 C 片（2 片）、去离子水 四、实验步骤 1. 0.005 mol·L-1 硫酸溶液的配制 用 0.5 ml 移液管移取 0.27 ml 98%浓硫酸放入事先已盛有蒸馏水 的烧杯中，搅拌，冷却至室温后移入 1000 ml 容量瓶，稀释至刻度，待 用。 2. 0.5 g·L-1 对照品溶液的配制 精密称取 105 干燥至恒重的维生素 C 对照品 50 mg 置 100 ml 量瓶中，加 0.005 mol·L-1 硫酸溶液制成 0.5 g·L-1 对照品溶液。 3. 维生素 C 对照品标准溶液的配制 用 5 ml 移液管精密量取 0.5 g·L-1 对照品溶液 0.5、1.0、1.5、2.0、 2.5 ml，分别置 100 ml 量瓶中，用 0.005 mol·L-1 硫酸溶液稀释至刻度， 摇匀，待用。 4. 测定波长及标准曲线 以0.005 mol·L-1 硫酸溶液为空白，测定维生素C在稀硫酸溶液中 最大吸收波长，并在此波长处测定维生素C对照品标准溶液的吸光度， 以浓度对吸光度作线性回归。 5. 样品含量测定 取维生素C片2片，精密称定，研细，精密称取适量（0.06g，约相当 于维生素C 50 mg）置100 ml容量瓶中，加0.005 mol·L-1硫酸溶液适量， 超声5 min使溶解，再加0.005 mol·L-1硫酸溶液至刻度，摇匀，滤过，弃 去初滤液，精密量取续滤液2.0 ml置100 ml量瓶中，加0.005 mol·L-1硫 酸溶液至刻度，摇匀，在最大吸收波长处测定吸光度。 6.空白试验 模拟维生素C片处方比例，精密称取辅料适量置100 ml量瓶中，与 步骤5样品含量测定同法操作，在最大吸收波长处测定吸收度为0。 7.回收率试验 先测得2 ml样品溶液的吸光度A （C ），再取0.0125 g/L 的VC 标 1 1 液200 μl，于2 ml 已测得吸光度A 的样品溶