GB2020油菜茎基溃疡病菌活性检测方法-标准全文及编制说明.pdfVIP

GB2020油菜茎基溃疡病菌活性检测方法-编制说明.pdf GB2020油菜茎基溃疡病菌活性检测方法.pdf 国家标准《油菜茎基溃疡病菌活性检测方法》编制说明 1. 目的和意义 国际植物检疫措施标准（ISPM.27 ）限定有害生物诊断规程中明确指出，诊 断规程需提供关于有害生物生存能力的信息和指导，记录有害生物的状况，对病 原菌、昆虫、线虫活性状态的判定是粮食、水果等植物及植物产品国际贸易的必 然要求。从科学研究现状分析，对细胞和个体死活的描述和鉴别，通常以有无生 命力为依据，但有些病原真菌厚垣孢子的休眠期很长，打破休眠机制也较为复杂， 一旦这些细胞自身休眠解除，就会继续繁殖形成为害。在检疫实践中，不同的检 疫处理方法对危险性有害生物的处理效果如何，也需要通过活性鉴别来评价和筛 选。建立对植物病原真菌活性鉴别的科学理论依据，依此建立活性鉴别的检测方 法，不仅是一项科学问题，也是一项技术问题。 油菜茎基溃疡病菌是油菜上最重要的真菌病害，在澳大利亚、加拿大和欧洲 一些国家广泛发生，对油菜子叶、真叶、茎秆、荚和根等部位均可构成危害，对 油菜生长及油菜籽产量构成极大威胁，为油菜的“头号杀手”。对于进口加拿大油 菜籽，近几年双边围绕油菜茎基溃疡病菌这一严重危害油菜种植生产的病害的限 量与防控展开了细致深入的谈判，力求寻找一种可靠且稳定的病原菌活性判定依 据，建立病原菌活性与防控风险之间的相关性，双方科学家已开展多轮试验验证， 为双边油菜籽贸易谈判提供技术支撑。病原菌的活性状态不同，其致病能力不同， 活性状态直接影响到对其检疫风险的判定，进而决定采取的检疫监管政策和防控 措施。同时，多病原菌活性的检测，可以用于鉴定除害处理的效果，评估检疫处 理方法的有效性，为检疫处理提供技术支撑。 2.标准编制的主要工作过程 2.1 任务来源 本标准为“十三五”国家重点研发计划专项“国家质量基础的共性技术研 究与应用（NQI ）”中《高频跨境生物多目标高精准检测技术研究》项目 （2016YFF0203200 ）的输出标准。 2.2 立项研究阶段 筛选研究适用于油菜茎基溃疡病菌死细胞和活细胞染色且稳定的染色剂和 染色方法，建立激光扫描共焦显微镜最佳成像效果的技术参数和判定标准，对建 立的方法进行反复的验证和统计检验。 2.3 起草阶段 对建立标准方法，并进行准确性和重复性验证；确定检测程序标准，建立文 本化标准格式，同时起草国家标准。 2.4 征求意见阶段 征询意见和补充相关的验证资料，准备结题。 2.5 标准的主要起草人及承担的工作 标准的主要起草人及承担的相关工作如下： 姓 名 单 位 职务/职称 专业特长 任务、分工 高瑞芳 深圳海关 高级农艺师 植物病原真菌检测 主持人 章桂明 深圳海关 研究员 植物病原真菌检测 参与 王颖 深圳海关 研究员 植物病原真菌检测 参与 黄河清 深圳海关 中级 显微成像技术 参与 向才玉 深圳海关 高级农艺师 显微成像技术 参与 潘广 深圳海关 农艺师 显微成像技术 参与 3. 标准主要内容的依据 3.1 范围 本标准规定了应用激光扫描共聚焦显微镜或普通荧光显微镜对油菜茎基溃 疡病菌(Leptosphaera maculans Desm Ces. De Not.)分生孢子进行活性检测的方 法。 本标准适用于油菜茎基溃疡病菌相关寄主中携带的油菜茎基溃疡病菌分生 孢子的活性检测鉴定。 3.2 原理 应用荧光染料对油菜茎基溃疡病菌分生孢子进行染色处理，根据碘化丙啶 （PI ）可使不具活性的分生孢子发出红色荧光、具有活性的分生孢子不发出荧光， 运用激光扫描共聚焦显微镜或普通荧光显微镜对荧光染料处理的分生孢子进行 检测，