呼吸道联检操作规程SOP资料.pdfVIP

________________医院检验科 _____室 （SOP）文件 撰 写 人： 审 核 人： 批 准 人： 批准日期： 2007年 7月31 日 启用日期： 2007年 8月 1 日 二零零七年七月一日制 1 / 11 批准页 根据《临床检验操作规程》 (2006年,第三版)，化学放光仪 （ ）, 洗 Anthos lucy 板机（Anthos fluido）使用说明书；免疫检验有关试剂盒、质控品的使用操作说明 书；《消毒技术规范》以及医院内部有关管理制度、生物安全制度的规定和要求，临 床免疫检验操作规程文件 NO.2 版经实际运行，现予以批准通过，于 2007 年 8 月 1 日起生效并开始实施。免疫室和检验科有关工作人员必须认真学习，严格遵照执行 （NO.2 版依据检验技术和我科工作发展及管理工作的需求进行的补充完善和改进另 行通知）。任何个人不得更改，实际工作中如发现不妥之处，请按程序以文字形式向 审核人汇报；在未经批准人同意/批准新文件之前，仍执行此文 _____________医院检验科 2007年 7月 31 日 呼吸道 九联检操作规程 1.项目中文名称：九项呼吸道感染病原体 IgM 抗体检测（间接免疫荧光法） 项目英文名称：PNEUMOSLIDE IgM 2.实验原理与方法： 2.1 原理： 间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发 生的反应 样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去 在下一步骤中，抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应。用免疫荧光显微镜观察结果 2.2 方法：间接免疫荧光法 3.设备性能参数： 2 / 11 4.标本的要求： 需由专业人员无菌静脉穿刺采集血液。使用消毒或无菌技术能保持样本的完整性。血清样本采集 后如不在8 小时内检测应2~8 ºC 冷藏，如7 天内不检测，则应冷冻（-20ºC ）保存。不要反复冻 融以防止免疫球蛋白滴度降低，特别是IgM 。不要使用高血脂或污染的血清。若样本中含有微粒 要离心使之澄清。 4.仪器：荧光显微镜 5.试剂厂家及名称：西班牙VIRCELL 公司 6.操作步骤： 1. 使用前，将所有试剂平衡至室温。载玻片平衡至室温后再打开。 2. 样本的稀释：按1:1 比例稀释血清样本，即25µL 血清加 25µL PBS2 中。阴阳性对照34 不 需要稀释。 3. 用抗人IgG 吸附剂7 处理稀释后的血清：将30µL 稀释后的血清加 150µL 吸附剂中，彻底 混匀。阴阳性对照3 和 4 不需吸附剂处理。处理后的血清要离心10-15 分钟除去沉淀，以防干 扰检测。 4. 在载玻片 1 的每孔中加15µL 吸附剂处理过的血清（一份样本对应一个载玻片）。在一个载玻 片的每孔中加 15µL 不稀释的阳性对照3，在另一个载玻片的每孔中加 15µL 不稀释的阴性对 照4。 5. 将载玻片放入湿盒中，37℃温育90 分钟。 6. 用PBS 2 的缓慢水流冲洗载玻片1 （避免直接冲入孔内）后，浸泡在PBS 中并放置在水平摇 床上轻轻摇动10 分钟。再用蒸馏水缓慢水流冲洗（避免直接冲入孔内）。 7. 载玻片1 自然晾干。 8. 每孔加 15µL 抗人IgM FITC 结合物溶液5M （不需稀释）。 9. 将载玻片放入湿盒，37℃温育30 分钟。 10. 重复6 和7 的洗涤步骤。 11. 加几小滴封闭介质6，小心盖上盖玻片。 12. 尽快用荧光显微镜在400 倍放大率下观察结果。如果不能立即观察，可将其避光放置于2-8 C 不超过24 小时。 * 简明操作程 序（将风干 改成晾干）