实验6——可溶性蛋白质的测定教学教案.pptVIP

实验六：可溶性蛋白质的测定（考马斯亮蓝G-250法） 1．实验原理　　 考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。该染料在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素络合物在595nm波长下有最大光吸收。其吸光值与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。 2. 适用范围与特点 该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法（劳里法）还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0~1000μg/mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。 该法的不足是当蛋白质含量过高时，线性关系较差，重复性也较差，同时染料很容易结合到比色皿上，给实验结果造成一定误差。 3. 实验材料、仪器与试剂 材料：豆芽 仪器：可见分光光度计，分析天平，容量瓶，移液管，具塞刻度试管，研钵，漏斗，铁架台，玻璃棒。 试剂：考马斯亮蓝G-250，无水乙醇，磷酸，牛血清蛋白。 4. 实验步骤 （1）样品处理： 准确称取5g豆芽于研钵中，充分研磨后转移至100mL容量瓶中，静置20min后过滤，弃去初滤液后备用。 （2）标准曲线的绘制 1 2 3 4 5 6 BSA（mL） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 水（