实验十免疫细胞化学染色观察肿瘤细胞蛋白的表达与分布1知识课件.pptVIP

实验十 免疫细胞化学染色观察肿瘤细胞蛋白的表达与分布 ;掌握免疫细胞化学技术的基本原理; 了解免疫细胞化学技术在肿瘤病理 学等学科领域的广泛应用. ;抗原的概念 一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答，并能与效应的免疫应答产物即抗体和致敏淋巴细胞在体内或体外发生特异性结合的物质，也称为免疫原。 前一种性能称为免疫原性或抗原性，后一种性能称为反应原性或免疫反应性。 ; 抗体能特异性地识别相应的抗原，并与之结合。这种结合在体外也能发生，这种特性就是许多免疫检测方法的基础。;二、试剂与器材; 玻片细胞置于甲醇中-10℃固定5min，室温凉干（或冷 丙酮固定5min，室温凉干）； PBS漂洗2min×3次； 3% H2O2室温孵育10min（以去除细胞内源性过氧化物 酶活性）； PBS漂洗5min×3次； 10%正常羊血清封闭液（0.1M PBS配制）室温封闭20min； 弃封闭液（此步骤不必PBS洗涤）； 用适当比例稀释的一抗（一般稀释比为1:100-1:200）37℃ 孵育1h（或4℃孵育过夜）； PBS漂洗5min×3次；;用适当比例稀释的生物素化二抗（一般稀释比例约1:100-1:200）37℃孵育10-15min；PBS漂洗5min×3次；亲和素―生物素化过氧化物酶（avidin biotinylated