2019年基因敲除小鼠技术专题.pptVIP

基因的目的，它克服了 ZFN 方法不能识别任意目 标基因序列，以及识别序列经常受上下游序列影 响等问题，而具有 ZFN 相等或更好的灵活性，使 基因操作变得更加简单方便。然而 同样因为脱靶的问题，利用 TALEN 技术进行小鼠 的基因修饰仍然无法取代传统技术。 一、什么是 ES 细胞显微注射？ 答：胚胎干细胞显微注射是制作基因敲除小鼠的 一个最常用的方法。主要过程是将携带目的基因 的胚胎干细胞注射到小鼠的囊胚腔中获得嵌合体 小鼠。所得嵌合体小鼠的组织，将同时含有来源 于囊胚的细胞和胚胎干细胞。嵌合体小 鼠必须和野生型小鼠配种以决定遗传改变的生殖 系能否传递，这样可能获得转基因或打靶基因 （来源于胚胎干细胞）稳定的生殖系传递的小鼠。 一般情况下，大约能获得 50% 继承了 目的基因的后代。 二、嵌合体 遗传学上用以指不同遗传性状嵌合或混杂表现的 个体。免疫学上的涵义则指一个机体身上有两种 或两种以上染色体组成不同的细胞系同时存在 , 彼此能够耐受 , 不产生排斥反应 , 相互间处在嵌合 状态。在基因敲除鼠中指通过向囊胚注射被外源 基因转化了的胚胎干细胞，使得发育成为的个体 中含有不同基因型的细胞，产生的个 体也叫嵌合体，即该生物体中嵌合了两种不同遗 传结构的细胞（一种是基因型被改变了的细胞， 另一种是原来的基因型的细胞）。 三、条件性敲除