MiRNA与转录后调控 课件.pptVIP

3.2 miRNA 调控造血干细胞的分化 3 种 miRNA 控制造血干细胞向淋巴细胞的分化过程 miR142S miR223 Science 303(5654):83-86,2004. 31 ppt 课件 ? Northern 杂交确定了 miR-375 在 INS-1 细胞的表达 ? miR-375 在部分糖尿病模型 NOD 小鼠的异常高表达 （阳性率 60% ） ? 反义 2 -O- 甲基化寡核苷酸技术，特异性抑制 miR- 375 ? 不同浓度葡萄糖刺激经 2 -O-me-eGFP(375) 处理后 INS-1 细胞胰岛素的分泌 立论依据 —— 实验基础 0 2 4 6 8 10 12 14 INS-1 2-O-me-eGFP 2-O-me-375 i n s u l i n ( n g / m l ) 2.8mM glucose 25mM glucose ? Mtpn 在 INS-1 细胞、正常小鼠和 NOD 小鼠的差 异表达 32 ppt 课件 4. miRNA 基因异常与肿瘤发生相关 人类 52 ％的 miRNAs 定位在染色体的脆性位点 (FRAs) 61 个 miRs 和 FRAs 定位在同一 染色体带 ( 红色星表示 ), 红 色箭头表示癌症病例中观察 到的频率较高的 FRAs. PNAS 101(9):2999-3004,2004. 人核型图显示 113 个 FRAs 和 186 miRs 的位置关系 33 ppt 课件 某些定位在染色体的脆性位点 (FRAs) 的 miRNAs 与肿瘤的发生有关 PNAS 101(9):2999-3004,2004. 34 ppt 课件 Nature 435(7043):834-838,2005. microarray 显示肿瘤和正常组织中 129 种 miRNA 的表达水平 众多肿瘤 miRNA 整体表达水平下降 35 ppt 课件 let-7 与肺癌的关系 正常肺组织中 let-7 非常丰富；但肺癌中 let-7 表达水平普遍下 降 人 RAS 是 let-7 的靶基因。体外证实 let-7 抑制肺癌细胞系的增殖。 肺癌组织中 let-7 表达不足， RAS 过度表达，癌细胞增殖迅速 . Cell 120(5):635-647,2005. N. Engl. J. Med. 352(23):2446-2448,2005 . 36 ppt 课件 Nature 435(7043):828-833,2005. 淋巴癌中 miR-17-92 簇的表达水平 转 miR-17-92 簇小鼠迅速诱发全身癌变，小鼠死亡加快 normal miR-17-92 簇可能是一种新的癌基因 37 ppt 课件 Nature Med 11(7): 713-714,2005. a ： miRNA 过度表达，抑制了抑癌基因的正常表达； b ： miRNA 表达过少或缺失，不能有效抑制癌基因 。 a b microRNAs 通过对抑癌基因和 / 或癌基因的调控 与肿瘤的发生相关 38 ppt 课件 动物中 miRNA 的功能 miRNA 靶基因 功能 品种 lin-4 lin-14 线虫幼虫发育时间控制 线虫 lin-28 线虫幼虫发育时间控制 线虫 Let-7 lin-41 线虫幼虫发育时间控制 线虫 Lin-57/hbl-1 线虫幼虫发育时间控制 线虫 Lsy-6 cog- 1 控制左右神经对称性 线虫 miR-273 die-1 控制左右神经对称性 线虫 Bantam hid 通过刺激细胞分化和阻止凋亡，调 控果蝇组织生长 果蝇 miR-14 ? 影响果蝇脂肪代谢和阻止凋亡 果蝇 miR-181 ? 控制小鼠造血作用 小鼠 miR-196a HOXB8 剪切靶 mRNA 小鼠 miR-375 Mtpn 调控胰岛素分泌 人 mir-143 ERK5 脂肪细胞； 人 39 ppt 课件 (IV) miRNA 的研究方法 ● miRNA 的寻找技术 ● miRNA 的检测技术 ● miRNA 功能的研究技术 40 ppt 课件 1.miRNA 基因的寻找 ○ 克隆构建 small RNA 库，进