胰岛素的合成、分泌和作用机制.pdfVIP

欢迎来主页下载 精品文档 胰岛素的合成、分泌和作用机制 胰岛素是由胰岛 B 细胞所分泌的，具有重要代谢调节作用的肽类激素。旱在 19 世 纪末期 ,von Mering 和 Minkowski 即指出，胰腺在抗糖尿病的作用中起重要作用。 1909 年和 1917 年， de Mayer 和 Sir Edward Sharpey — Schaffer 分别命名这种胰岛内调节血糖水平的 激素为“胰岛素”。直到 20 世纪 20 年代初期，加拿大人 Banting 、Best 和 Collip 才真正 分离出牛胰岛素，并稍后作为特效药应用于糖尿病患者。 随后，结晶胰岛素的获得，氨基酸 顺序的阐明， 具生物活性的胰岛素的合成， 胰岛素检测方法的建立， 对胰岛素生物合成途径 及分泌机制的认识， 胰岛素受体的发现， 均成为人类对胰岛素本身及相关疾病认识的里程碑。 随着医学及相关科学的发展， 特别是近年来分子生物学方法的广泛应用， 人们对这个领域的 认识突飞猛进，也推动了糖尿病学的迅速发展。 一、胰岛素的提取、纯化及结构特征 1 ．胰岛素的提取、纯化和检测 早期，胰岛素是以乙醇或酸性乙醇溶液来抽提的， 以这种方法抽提可使胰岛素从组织中溶解出来， 并灭活蛋白酶。 这种方法仍为现代提取方法 的基础。 在有机溶剂提取脂肪后． 含胰岛素的酸性乙醇的抽提物可经盐析及等电点沉淀等分 离，进一步作凝胶过滤， 离子交换， 高效液相色谱等纯化。以前曾一度认为以锌结晶方法可 有助于胰岛素的纯化， 现认为反复结晶仍不能去除胰岛中的其他成分， 如胰升糖素、 胰岛素 原、胰岛素样类似物及部分降解的胰岛素片段， 而且部分动物的胰岛素不能与锌结合或产生 结晶。 基因重组胰岛素的生物合成技术可得到不含其他激素的较纯净的胰岛素， 但仍常含有其他来 自宿主细菌或真菌的蛋白质污染，经凝胶过滤和离子亲和层析后，可得到纯度高于 99 ％的 胰岛素。 这种胰岛素对人的抗原性远小于来自动物的结晶胰岛素， 不易产生抗体， 更有利于 糖尿病病情的控制。 血清胰岛素测定可用放射免疫法等，但在精确度和敏感性方面仍有一定的局限性。 用聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效液相色谱可鉴定胰岛素的量及纯度， 并区分开胰岛素和胰岛素 原。各种免疫或生化的方法只能测定出样品的胰岛素的免疫纯度及含量， 即使较纯的胰岛素 仍需进行生物活性的评价， 可在体外用培养的脂肪细胞、 肝细胞来测定其在葡萄糖氧化， 脂 肪合成， 葡萄糖转运及蛋白质合成等作用， 亦可以用某些细胞膜抽提液来测定其与受体的结 合及生物效应。另一些实验室用体内降血糖试验来评估胰岛素的效价。 2 ．胰岛素结构 自 1955 年 Sanger 等首先阐明了完整的牛胰岛素一级结构以来，已 经鉴定了 70 余种脊椎类动物的胰岛素结构。他们与一些非脊椎类动物的胰岛素相关肽，如 蜗牛的生长刺激素， 蚕的胰岛素样脑肽等有着一定的同源性， 均为胰岛素基因超家族的成员。 脊椎类动物的胰岛素有着共同的结构特征：包括链内和链间二硫键的位置， A 链的 C端和 N 端氨基酸残基，以及 B 链 C 端的亲水基团。这些结构对保持胰岛素的二级结构和三级结构， 维持其与受体结合必须的空间构像非常重要。 去除或替换这些保守区域的氨基酸残基将严重 影响胰岛素的生