血小板活化与流式细胞仪分析.docx

PUT activation PUT activation 研究生免疫学POWERPOINT讲稿 PUT activation PUT activation 研究生免疫学POWERPOINT讲稿 血小板活化与流式细胞仪分析 血小板活化 ?使用流式细胞仪，同时分析血小板多个活化 指标，灵敏、蒋异地舷测全血中的血小板， 了解血小板的反应性和活化进程 ?血小板表面膜糖蛋白(GP) . PAC-1 ?颗粒膜GP的表达量变化蛊CD62P ?直接使用全血，样本更接近生理状况 ?操作步骤简便、用血量少、避免体外活化与 血小板亚群丢失 e血小板减少患者也能精确分析 TE Q nr% 制作：姚新生审校：孙万邦联条yxspah@;0852-8204419弋少口 V PUT activation PUT activation 研究生免疫学POWERPOINT讲稿 制作：姚新生 审校： 制作：姚新生 审校：孙万邦 联系：yxspah@;0852-8204419 8562206 PUT activation PUT activation 研究生免疫学POWERPOINT讲稿 制作：姚新生 审校： 制作：姚新生 审校：孙万邦 联系：yxspah@;0852-8204419 8562206 牛血小板活化的三色荧光分析 ?使用PerCP标记的泛血小板抗体CD61,特异 地测血小板表面的活化指标，避免碎片等非 特异干扰 ?选择活化血小板特异的表面标记PACJ, CD62P,检测血小板活化的不同阶段 SPAC-1FITC； IgM型抗体，是血小板活化的早期 标志，即活化的血小板膜糖蛋白复合物。 ? CD62P PE： IgGl型抗体，是血小板活化后颗粒 释放的标志 IPLT activation 血小板体外活化 ?血小板激活剂:ADP,活化终浓度 0.2uM ?试管内加入50ulADP, 450ul抗凝全血 ?轻轻混匀 ? 37吃温育5分钟 ?立即进行染色 PLT activation PLT activation PLT activation PLT activation 制作:姚新生审校：孙万邦 联系: 制作:姚新生审校：孙万邦 联系:yxspah@;0852-8204419 8562206 荧光染色 ?Falcon管顺序编号，阴性对照为正常人 未活化标本，阳性对照为正常人活化标 ?每一标本作2管:对照管和试验管 ?加入相应BDIS抗体及对照各10ul PerCPCD61CD61BDIS 抗体 FITC PE 对照管 PAC-1+RGDS IgGl PerCP CD61 CD61 荧光染色 ?对照管和实验管中各加入血标本5ul ?轻轻混匀，室温暗处孵育20分钟 ?各管中分别加入2?8 °C 1%多聚甲醛lml, 充分混匀,于2-8 °C暗处固定10分钟 ?24小时内上机，获取数据,分析结果 TE d nr% 制作：姚新生审校：孙万邦联系：yxspah@;0852-8204419弋少PL/ :式■专流式细胞仪测定研究生免疫学POWERPOINT :式 ■专 流式细胞仪测定 研究生免疫学POWERPOINT讲稿 ?检查鞘液筒和废液筒，打开流式细胞仪 ?做FACSComp,校正仪器 ?打开CELLQuest软件，顺序摆放试验管 ?调出获取条件，FSC和SSC选择Log模式, FSC-SSC点图中出现血小板细胞群 ? FL3设阈值，获取条件为CD61阳性 ?在FL1-FL2点图中，‘对照管目标细胞群位于左 下脚 ?获取对照管及试验管的数据 PLT activation PLT activation 研究生免疫学POWERPOINT讲稿 制作:姚新生 制作:姚新生审校：孙万邦 联系:yxspah@;0852-8204419 8562206 PLT activation PLT activation 研究生免疫学POWERPOINT讲稿 制作:姚新生 制作:姚新生审校：孙万邦 联系:yxspah@;0852-8204419 8562206 流式细胞仪分析 ? CD61 vs SSC点图中设门,找到CD61阳 性的血小板群 ?门内做PAC-1 vs CD62P点图,进行双参 数分析 ?结果统计就 PAC-1+, PACJ+CD62+, CD62+ %PLT 流式细胞仪测定 L . —rm 1(T 1IF it* ior ICP 心 PLT activation PLT activation 制作:姚新生审校：孙万邦 联系: 制作:姚新生审校：孙万邦 联系:yxspah@;0852-8204419 8562206 PLT activation PLT activation 制作:姚新生审校：孙万邦 联系: 制作:姚新生审校：孙万邦 联系: