环境微生物学-环境微生物学-试验一显微镜使用及微生物观察.docVIP

实验一：显微镜的使用及菌体形态观察 一、实验目的 1、掌握光学显微镜的结构、原理，学习光学显微镜的操作方法和保养。 2、观察细菌、放线菌、真核微生物的个体形态及真菌孢子类型，学习生物图的绘制。 3、学习用压滴法制作标本片。 二、实验仪器和材料 显微镜、载玻片、盖玻片，75%二甲苯、吸管、烧杯，香柏油，擦镜纸、吸水纸、浮游生物网 示范片：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、放线菌、酵母菌、青霉、曲霉、根霉、梨头霉、毛霉。 三、实验原理 （一）显微镜的结构和光学原理 显微镜分机械装置和光学系统两部分。 1、机械装置 （1）镜筒：镜筒上端装目镜，下端接转换器。镜筒有单筒和双筒两种。单筒有直立o）。双筒都是倾斜式的，并有屈光度调节装置，以备视力不同式和后倾斜式（倾角为45者调节使用。两筒之间可调距离，以适应两眼宽度不同者调节使用。 （2）转换器：转换器装在镜筒的下方，其上有三个孔或四个孔。不同规格的物镜旋转安装在各孔上，在显微镜不使用时，旋下物镜，用护盖盖住。 （3）载物台：载物台为方形（多数）或圆形的平台，中间有一光孔，孔的两侧各装一个夹片，右端夹片固定，左端夹片可旋转，载物台上还有移动器（其上有刻度标尺，用以标记玻片的位置），可纵向和横向移动，移动器的作用是夹住和移动标本片。 （4）镜臂：镜臂支撑镜筒、载物台、聚光器和调节器。镜臂有固定式和活动式（可改变倾斜度）两种。有弧形和折形两种。移动显微镜时用手握住镜臂进行移动。 （5）镜座：镜座为马蹄形和方形，具有一定的质量，支撑整台显微镜，马蹄形的镜座在其上有一可旋转的反光镜。 （6）调节器：调节器包括粗螺旋调节器和细螺旋调节器。可调节物镜与所需观察的物体之间的距离。 2、光学系统及其光学原理 显微镜的总放大倍数为物镜的放大倍数和目镜放大倍数的乘积。 1 （1）目镜 目镜一般有10×、16×两种，高级的显微镜还有5×和20×。 目镜上标有：N.A.1.25、100×、“OI”、160/0.17、0.16等字样，其中：N.A.1.25为数值孔径，100×为放大倍数，“OI”（即Oil immersion）表示油镜、160表示镜筒长，0.17表示要求盖波片的厚度，0.16为工作距离。 （2）物镜 物镜装在转换器的孔上，物镜镜头有低倍（4×/5×、10×/15×）、高倍（40×/45×）和油镜（100×）。 在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响显微镜的分辨力。油镜的放大倍数可达100×，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同，有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因为射入的光线较少，物像显现不清。所以为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃的折射率（n=1.55）相仿的镜油（通常用香柏油，其折射率n=1.52）。 显微镜的性能依赖于物镜的分辨力，分辨力即能分辨两相邻质点之间的最小距离的?（λ为光波波长），分辨力与数值孔径成反比，与能力。分辨力用δ表示，??5?0. .N.A波长成正比。增大数值孔径，缩短波长可提高显微镜的分辨力，使目的物的细微结构更清晰可见。事实上可见光的波长是不可能缩短的，只有靠增大数值孔径来提高分辨力。 物镜的数值孔径（numerical aperture，N.A.）等于n·sina，其意义为玻片与物镜之间物质的折射率乘上最大入射角的正弦。光线投射到物镜的角度越大，显微镜的效能越大，该角度的大小决定于物镜的直径和焦距。n是折射率，也是影响数值孔径的因素。空气的折射率n=1，水的折射率n=1.33，香柏油的折射率n=1.52，用油镜时，实际最大入射oo=0.866。N.A.=1.52×sin600.866=1.316。 角为60，则（3）光圈，光圈安装在载物台的下面，移动光圈的大小可调节进光量的大小。 （4）聚光器，聚光器安装在载物台的下面，光源来的光线通过聚光器被聚集成光锥照射到标本上，可增强照明度，提高物镜的分辨力。聚光器可上、下调节，在用高倍镜或油镜时需调节聚光器，合理调节聚光器和光圈的大小，可得到适当的光照和清晰的图象。 （5）滤光片，自然光由各种颜色的光组成，例如只需某一波长的光线，可选用合适的滤光片，可提高分辨力，增加反差和清晰度。滤光片有紫、黄、绿、蓝、红等颜色，根据标本的颜色在聚光器下加相应的滤光片。 （6）光源，显微镜的光源有自带光源和利用外界的自然光两种。利用外界自然光的反光镜有平面和凹面之分，在使用低倍或高倍镜观察时，用平面镜，使用油镜或光线较暗时，使用凹面镜。 2 （二）显微镜的操作 1、观察前的准备 （1）显微镜的安置 将显微镜放置在固定