PLEXERA生物分子相互作用仪操作规程.pdfVIP

PLEXERA 生物分子相互作用仪 （SPR-i ） 操作规程 开机，先开电脑，再开SPRi，关机相反。 测试前准备： 检查regenerant(甘胺酸,PH=2,10mM), buffer （PBS-T 0.05%T ），封闭 液Blocking( 乙醇胺) 样品制作在制样品中完成，压5-10 分钟左右，完成后检查是否有气 泡，检查两个小洞是否被堵。上样前要进行3 次Initial Prime, 2 次 regenerant Prime, 1 次Initial Prime. 上样时，先把芯片背面用丙酮擦拭干净，后要把芯片往里推到位，装 进后要反扣下来。 加折射油：折射率匹配油要滴在正中央，在接触折射油的瞬间压下去。 正式测试及参数设置： 1. 启动PLEXERA INSTRUMENT CONTROL SOFTWARE 在INSTRUMENT SETUP 中设置FLOW CELL （25 ）度和96 孔板温 度，打开H2O/BUFFER DEGASSER=ON WATER SENSOR=OFF( 已经 坏了) ；确认重生，缓冲，及废液正常。 2. 点LOAD INSTRUMENT 1》 如果有旧芯片，可以用它来做维护。PRIME 是对系统进行冲洗 并保证系统缓冲溶液均一性，并扣除可能气泡。一般重复3 次。 2》 load reagents,查检输液管对应试剂瓶溶液，PRIME 2 次 3》 用酒精轻轻擦拭棱镜和实验芯片背面。加折射油，装芯片。 4》 load ＆ ｐｒｉｍｅ ｆｌｏｗ ｃｅｌｌ， ｆｌｏｗ ｒａｔｅ设为30 ul, Duration 60sec, 使CELL 中冲满溶液。 3. 运行PRIME SYSTEM 一次，准备完毕。 实验方案设计： (一) WIZARD 2ml(PE)是BIG1-BIG6; 1ml 管是 SMALL1-SMALL2, 96 孔板是A1-H12. (二) 根据样品量，一般为700ml 左右，设置流速与时间，一般 REEAGENT,选择3X300 ，后把时间设定到当前。 (三) 改变LOCATION 一般把A12 改为BIG6. FLOW RATE 改 为2 ，ASSOCIATION/DISSOCIATION DURATION 都改 为300 ，再依次改INITIAL BASELINE…; BASELINE STABILIZATION BEFORE..,再改REGENERAT AFTER …,选择 FIRST REGEN SOLUTION=REG.1. POST-RUN 过夜时候使用，让系统慢慢流动。 ( 四) EXPORT METHOD,IMPORT METHOD 是保存或读取已经 有的方法。 设置光学系统 1) SET SPOT SELECTION,设置ROI 数量及尺寸，编号。在感兴趣点 点上一些点，设置20 ，20 ； 2) START, 选择30%，点MOVE TO PARKING ANGLE ，确认是否 移到此角度； 3) 设置感兴趣的点，在样品中心点，多个选择按CTRL.放小用 SHIFT，一般不显示这些点周围的卫星点； 4) 选好点好，观察基线位置，一般在40-90AU 之间，这样可以保证 所有感兴趣点在线性范围内，保证较准操作的有效性； 5) RUN,完成后保存AVI ，文件保存在自己人名的文件中，以时间命 名； 6) 其他数据保存：点SAVE ROI CHART DATA 保存ROI 区域实时检 测数据（.TXT 格式），保存；另外，保存表面图，大小图各一张， 要保证能看清全部打印点；保存30%共振角图一张；保存 METHORD ，保存带感兴趣点的实时全图一张； 关闭系统 把BUFFER 改成H2O 后，INITIAL PRIME 3 次，清洗系统。关闭软 件，关机，再关电脑。 系统维护: 1，从系统结构来看废芯片可以直接做维护； 2 ，0