紫外分光光度法 有机物的定性与定量分析课堂.ppt

紫外分光光度法 有机物定性定量 仪器分析实验 1 一、 目的要求 ? 1. 掌握紫外分光光度法的基本原理和条件。 ? 2. 掌握吸收曲线的测绘和测量波长的选择， 了解最大吸收波长的重要性。 ? 3. 熟悉朗伯一比尔定律的应用，掌握标准曲 线法定量的技术。 ? 4. 熟练掌握紫外分光光度计和石英比色皿的 使用方法。 2 二、基本原理 ? 【名称】 苯甲酸 Benzoic Acid ? 【其他名称】 安息香酸 （ carboxybenzene ）、 苯酸（ phenylformic acid ）、苯 蚁酸 ? 【适应】与水杨酸合用于成人皮肤真菌病，浅部真 菌感染如体癣、手癣及足癣等，用于食品和药物制 剂的消毒防腐剂，一般浓度为 0.2% ，或用 0.5% 的 苯甲酸钠，溶解度更好。 3 二、有机物吸收光谱与电子跃迁 ultraviolet spectrometry of organic compounds 有机化合物的紫外 — 可见吸收光谱是三种电子跃迁的结果： σ 电子、π电子、 n 电子 。 分子轨道理论 ：成键轨道 — 反键轨道。 当外层电子吸收紫外或可见辐射后，就从基态向激发态 ( 反 键轨道 ) 跃迁。主要有 四种跃迁 所需能量 ΔΕ 大小顺序 为： n →π ＊ < π→π ＊ < n → σ ＊ < σ → σ ＊ s p * s * R K E , B n p ? E C O H n p s H 4 2 σ→σ ＊ 跃迁 所需能量最大；σ电子只有吸收远紫外光的能量才能发 生跃迁； 饱和烷烃的分子吸收光谱出现在远紫外区； 吸收波长 λ <200 nm ； 例：甲烷的 λ max 为 125nm , 乙烷 λ max 为 135nm 。 只能被真空紫外分光光度计检测到； 作为溶剂使用； s p * s * R K E , B n p ? E 5 3 n →σ ＊ 跃迁 所需能量较大。 吸收波长为 150 ～ 250nm ，大部分在远紫外区，近紫外区 仍不易观察到。 含非键电子的饱和烃衍生物 ( 含 N 、 O 、 S 和卤素等杂原 子 ) 均呈现 n →σ * 跃迁。 600 215 CH 3 NH 2 365 258 CH 3 I 200 173 CH 3 CL 150 184 CH 3 OH 1480 167 H 2 O ? max ? max （ nm ） 化合物 6 4 π→π ＊ 跃迁 所需能量较小，吸收波长处于远紫外区的近紫外端或近 紫外区， ε max 一般在 10 4 L · mol － 1 · cm － 1 以上，属于强吸收。 （ 1 ） 不饱和烃 π → π * 跃迁 乙烯π→π * 跃迁的 λ max 为 162nm ， ε max 为 : 1 × 10 4 L · mol -1 · cm － 1 。 K 带 —— 共轭非封闭体系的 p ? p * 跃迁 C=C 发色基团， 但 p ? p * ? 200 nm 。 c c H H H H 取代基 -SR -NR 2 -OR -Cl CH 3 红移距离 45(nm) 40(nm) 30(nm) 5(nm) 5(nm) ? max =162nm 助色基团取代 p p （ K 带 ) 发生红移。 7 165nm 217nm p * p p p * p * ? p ? p ? p p * (HOMO LVMO) ? ? ? ? max ? ? 基 ----- 是由非环或六环共轭二烯母体决定的基准值； 无环、非稠环二烯母体： ? max =217 nm 共轭烯烃（不多于四个双键） p p * 跃迁吸收峰位置可由 伍德 沃德 —— 菲泽 规则估算。 ? max = ? 基 + ? n i ? i （ 2 ）共轭烯烃中的 p → p * 8 三、仪器与试剂 ? 1. 仪器 ? T6 型（或其他型号）紫外可见分光光度计 ? 石英比色皿 1cm 2 只 ? 比色管 50mL 6 只 ? 吸量管 25mL 、 l0mL 、 5mL 各 1 支 9 10 三、仪器与试剂 ? 2. 试剂 ? 1mg/mL 苯甲酸标准储备液。 ? 100 ug/mL 苯甲酸标准溶液： 准确吸取 1mg/mL 的 苯甲酸标准储备液 25.00mL ，在 250mL 容量瓶中定容。 11 四、实验步骤 ? 1. 溶液的配制 取 50mL 的比色管 6 只，蒸馏水清洗干净， 编 号 ， 用 5.00mL 吸 量 管 分 别 准 确 加 入 l00 μ g/ml 的 苯 甲 酸 标 准 溶 液 0 、 1.00mL 、 2.00mL 、 3.00mL 、