大鼠脑缺血再灌注损伤后Netrin-1对血脑屏障通透性的作用机制.pdfVIP

摘要 目的： 通过分析大鼠脑缺血再灌注后相关蛋白的时相性变化及Netrin-1对血脑屏障是否具 有保护作用，为临床上治疗急性缺血性卒中相关疾病提供实验室的科学依据。 方法： SD 36 6 6 MCAO12h 成年 大鼠 只，随机将大鼠分为 组，每组 只，分为假手术组和 组、MCAO24h 组、MCAO48h 组、PBS组和NT-1组。参照改良Longa 的方法建立右侧 大脑中动脉阻断(Middlecerebral artery occlusion，MCAO)的模型 （阻断2h），造模后通 过Zea-Longa 法对动物中枢神经系统功能行为学进行评分，HE 染色评估鉴定脑缺血组 织模型，根据脑组织标本的损伤情况鉴定脑缺血模型，只打开颈动脉鞘不做颈动脉阻断 Sham MCAO 12 24 缺血处理的为假手术组即 组， 组为分别在缺血再灌注后 小时、 小时、 48 PBS NT-1 PBS 小时采集脑组织标本， 组与 组在建立模型成功后立即注射等体积的 或Netrin-1溶液，24 小时后立即采集脑组织标本。通过Zea-Longa 法对大鼠中枢神经的 功能进行行为学评分，干湿重法检测脑组织的含水量，Westernblot 检测脑组织标本中 缺血梗死区Occludin、Claudin-5、ZO-1及Caspase-3表达的水平。免疫荧光检测脑组织 标本中缺血梗死区Occludin、Albumin 表达与分布。 结果： 脑组织样本含水量，与假手术组样本相比，MCAO12h、24h、48h 均呈现递增趋势； NT-1 MCAO24h , MCAO24h NT-1 组较 组下降。神经行为学评分与 组相比， 组较下降。 MCAO24h Occludin Claudin-5 ZO-1 与假手术组样本相比， 组 、 和 蛋白表达显著下降， Caspase-3 蛋白表达显著上升，建模成功后随时间变化Occludin、Claudin-5和ZO-1蛋白 48h Caspase-3 48h NT-1 表达均开始下降， 达到最低值， 开始上升， 达到最高值； 样本组 与假手术组比较，Occludin、Claudin-5和ZO-1蛋白表达有所下降，但与MCAO24h 组 相比，下降程度不及MCAO24h 明显，同样NT-1样本组的Caspase-3 蛋白表达较假手术 组有所上升但与MCAO24h 组相比，上升程度不及MCAO24h 明显。在免疫荧光方面， 与假手术组相比，MCAO 组Occludin 明显下降，Albumin 明显上升，NT-1组较假手术 组下降及上升数量少于MCAO 组。 结论： 脑缺血再灌注损伤后Occludin、Claudin-5和ZO-1呈下降趋势，Caspase-3 明显上升； Netrin-1对脑缺血再灌注损伤血脑屏障通透性具有保护作用。 关键词：急性缺血性卒中；再灌注损伤；血脑屏障；Netrin-1 Abstract Objective: To analyze the time-phase changes of Occludin, Claudin-5, ZO-1 and Caspase-3 after cerebral ischemia-reperfusion in rats and explore the protective effect of Ne