第七章应用生物制药工艺学.pdf

第五节 凝胶层析的应用 第七章 第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 一、脱盐和浓缩 二、分子量测定 三、分离纯化 第七章 第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 2 一、脱盐和浓缩 • 脱盐用的凝胶多为大粒度的，高交联度的 凝胶。 • 交联度大，凝胶颗粒强度好；凝胶粒度大， 流速高。 • 样品体积最好小于内水体积的三分之一。 第七章 第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 3 浓缩 • 采用包埋法 • 直接投入法 第七章 第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 4 二、分子量测定 • 在凝胶的分离范围内，不同分子量的物质 其洗脱体积V 及分配系数K 值随分子量增加 e d 而下降。 • 对于一个特定凝胶柱，待测定物质的洗脱 体积与分子量的关系符合公式 • Ve=‐KlogM+C 第七章 第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 5 分子量的测定 • （1）求解法:（两个已知分子量的蛋白质 过柱） • V =C－KlogM el 1 • Ve2=C －KlogM2 • （2）标准曲线法:（先以3个以上已知分子 量的标准蛋白过柱 ）:  • 标准曲线法准确性较高 第七章 第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 6 V 与分子量的关系 e 图7.29 一些球蛋白分子量与V 的关系 e 柱：40 ×2.4cm ；洗脱液；0.05mol/L Tris-HCl缓冲液pH7.5 （含0.1molKCl） 1．大豆胰蛋白酶抑剂；2．细胞色素C二聚体；3．胰凝乳蛋白酶原；4 ．卵清蛋 白；5．血清白蛋白； 6 ．血清白蛋白二聚体；7．γ-球蛋白；8．甲状腺球蛋白；9．蔗糖；10．胰高 血糖素；11．细胞色素C5611 ； 12．细胞色素C5611 ；13．核糖核酸酶；14．α-乳清蛋白；15．肌红蛋白 7 第七章 第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 三、凝胶层析在生化制药中的应用 • （一）去热原 • 吸附的专一性不强。 • 对SephadexG‐25来说，氨基酸Kd值等于1，热原性 物质Kd值都等于0 。 第七章 第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 8 （二）分离纯化 • SephadexG‐50纯化胰岛素，除去胰岛素中 前胰岛素和其它大分子抗原物质。 • 凝胶离子交换剂。 • DEAE‐SephadexA‐50精制透明质酸酶。 第七章 第一节 第二节 第三节 第四节 第五节