蜡样芽胞杆菌培训课件.pptVIP

蜡样芽胞杆菌 （一）生物学特性 1、形态与染色 革兰氏阳性大杆菌，宽度在1 μm或1 μm以上，芽孢呈卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中央或稍偏于一端。 需氧，最适生长温度30~32℃。 在肉汤中混浊生长，有菌膜或壁环，振摇易乳化。 在普通琼脂平板上，菌落灰白色，不透明，边缘不整齐，表面粗糙，呈毛玻璃状或白蜡状。 在血平板上，菌落呈浅灰色，不透明，似白色毛玻璃状，有溶血环。 在甘露醇卵黄多粘菌素平板上，菌落呈粉红色，具有白色混浊环（不发酵甘露醇、产生卵磷脂酶） 2、培养特性 能分解葡萄糖，麦芽糖，蔗糖，水杨苷，产酸不产气。 不分解乳糖，甘露醇，阿拉伯糖，山梨醇，木糖 H2S（-），尿素酶试验（-）卵磷脂酶（+）， V-P试验（+），液化明胶。 3、生化反应 食品蜡样芽胞杆菌数量106/g（mL）时常可导致食物中毒，导致中毒的主要原因是其产生的肠毒素 。 肠毒素类型： 耐热性肠毒素：100℃30min不能被破坏，常在米饭中形成。 不耐热肠毒素：能在各种食物中形成。 临床症状：食物中毒，分为呕吐型和腹泻型两类。 二、致病性 三、检验方法 1、检验标准； GB 4789.14—2003 2、培养基和试剂 培养基: 肉浸液肉汤培养基 酪蛋白琼脂培养基 动力-硝酸盐培养基 缓冲葡萄糖蛋白胨水 血琼脂培养基 木糖-明胶培养基 甘露醇卵黄多粘菌素(MYP)琼脂培养基、 试剂：0.5%碱性复红染色液、革兰氏染色液、3%过氧化氢溶液、甲萘胺-乙酸溶液、对氨基苯磺酸-乙酸溶液。 3、检验程序 36℃±1℃ 12 h ~ 20 h 37℃，18 h ~ 24 h 36℃±1℃ 12 h ~ 20 h 检 样 25 g（mL）加225 mL生理盐水 菌数计算 做成10-1~10-5的稀释液 选择性培养基 （分离培养） MYP 营养琼脂培养基 生长及菌落观察 染色镜检 生化试验 菌株保存 报 告 选择性培养基 （菌数测定） MYP 包括四个步骤： ①菌数测定:涂布甘露醇卵黄多粘菌素（MYP） 平板计数。 ②分离培养:从MYP上 挑可疑菌落进行纯培养。 ③证实实验:包括形态观察、培养特性、生化性状和生化分型试验。 ④与类似菌的鉴别：主要是与苏云金芽孢杆菌的鉴别。 ⑤结果报告：报告每g（mL）检样中所含的蜡样芽孢杆菌数。 将样品稀释液0.1 mL涂布于甘露醇卵黄多粘菌素（MYP）琼脂平板上培养后，选取适当菌落数的平板进行计数。计数后，从中挑取5个典型菌落做证实试验。根据证实的蜡样芽孢杆菌的菌落数计算出该平板上的菌落数。 蜡样芽孢杆菌数=可疑菌落数×证实为阳性菌落数的比例×稀释倍数×10 菌数测定： MYP培养基中含有卵黄、甘露醇、多粘菌素和pH指示剂酚红等。多粘菌素可抑制杂菌的生长。 蜡样芽孢杆菌不发酵甘露醇，菌落为粉红色（否则为黄色）。 该菌产生卵磷脂酶，由于脂肪和卵磷脂被分解，在菌落周围产生粉红色的晕。 分离培养和证实试验: 分离培养：从MYP平板上挑可疑菌落到营养琼脂上进行纯培养。 证实试验： （1）形态观察 （2）培养特性（3）生化性状及生化分型 ①生化性状 本菌有动力；能产生卵磷脂酶和酪蛋白酶；过氧化氢酶试验阳性；溶血；不发酵甘露醇和木糖；常能液化明胶和使硝酸盐还原；在厌氧条件下能发酵葡萄糖。②生化分型 根据蜡样芽孢杆菌对柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、淀粉水解、V-P反应、明胶液化性状的试验，分成不同的型别。 型 别 生 化 试 验 柠檬酸盐利用 硝酸盐还原 淀粉水解 V-P反应 明胶液化 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 ＋ － ＋ － － ＋ ＋ － － － ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － － － ＋ ＋ － ＋ － － ＋ － － ＋ ＋ － ＋ － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － － － － － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ 表1 蜡样芽孢杆菌生化分型 表2 蜡样芽孢杆菌与其他类似菌的鉴别 项 目 巨大芽孢杆菌 蜡样芽孢 杆菌 苏云金芽孢 杆菌 蕈状芽孢杆菌 炭疽芽孢杆菌 过氧化氢酶 动力 硝酸盐还原 酪蛋白分解 卵黄反应 葡萄糖利用（厌氧） 甘露醇 木糖 溶血 已知致病菌特性 ＋ ＋/－ － ＋/－ － － ＋ ＋/－ － ＋ ＋/－ ＋ ＋ ＋ ＋ － － ＋ 产生肠毒素 ＋ ＋/－ ＋ ＋/－ ＋ ＋ － － ＋ 对昆虫致病的内毒素结晶 ＋ － ＋ ＋/－ ＋ ＋ － － －/＋ 假根样生长 ＋ － ＋ －/＋