同种免疫性血小板减少症诊断新方法 PowerPoi.pptVIP

在昆虫细胞中可溶的重组人类血小 板抗原产品 可溶性重组 HPA-1a and -1b 用 rGPIIIa 抗体 检测 anti-HPA-1a （ ELISA ） 凝胶抗原特异测定 (GASA) 血小板抗体测定： MAIPA vs. GASA 抗原 - 抗体的“锁与钥匙”的概念 新的血小板抗体测定方法 纯化血小板抗原或者重组血小板抗原 在 SPR （表面激元共振， Surface Plasmon Resonance,SPR) 中的应用 借助 SPR 技术的抗原 - 抗体相互作用 的实时分析 表面等离激元（ SPR ） 实时蛋白质 - 蛋白质交互作用 在 SPR 中用 Mabs 的 HPA-1a and HPA-1b 抗原的反应 SPR 技术的原则 MabSZ21: HPA- 1a “Specific” 单克隆抗体 SZ-21 和抗 PlA1 抗体的竞争性结 合及这种结合潜在的临床应用 Xi X ， Zhao Y ， Jiang H ， Wu Q ， LI P ， RUAN C 中国 · 江苏血液研究所 、苏州医科大学 Nouv Rev Fr Hematol.1992;34(3):239-42 同种免疫性血小板减少症诊断 新方法 Dr. Sentot Santoso PhD 血小板输注讨论会 中国 · 广州 2009.4.27-4.30 同种免疫性血小板减少综合症 ? 胎儿 / 新生儿同种免疫性血小板减少 (FNAIT) ? 血小板输注无效 ? 输注后紫癜 ? 被动性血小板减少症 ? 移植相关性血小板减少 FAINT 的发病机制 人类血小板同种抗原 新的人类血小板同种抗原 中国人群的人类血小板同种抗原 中国人群的人类血小板同种抗原表统计 同种免疫性血小板减少症的诊 断学 抗原测定 表型 （ PIFT, MAIPA ） 基因分型 （ PCR-RFLP , PCR-SSP , TaqMan ） 特异血清，血小板及罕见的 HPA 基因型 抗体测定 结合测定 （ PIFT, ELISA, Flowcytometry ） 糖蛋白特异免疫测定法 ( MAIPA 血小板抗原单克隆抗体固定法 ) 新一代血小板抗体试验？ 问题 ? 我们如何改进同种免疫性血小板减少症的 诊断呢？ 以稳定的细胞系为来源的 DNA 产品 和血小板同种抗原 ? 基因分型，来自于人类血小板同种抗原的 表型的献血者的Ｂ淋巴细胞系 ? 抗体鉴定，转染的 CHO 细胞稳定表达的人 类血小板同种抗原 以Ｂ淋巴细胞系作为来源获得标准 DNA 人类血小板同种抗原基因分型的 Ｂ淋巴细胞系 ISTH/ISBT 血小板基因型鉴定实验室 特异等位片段细胞系表达人类血小 板同种抗原 被转染的 CHO 细胞表达 ＨＰＡｓ 鉴定低频抗原 HPA-8bw,-11bw,13bw 引起的同种免疫反应 问题 血小板抗体测定是否可以进一步改善？ 血小板抗体测定的进展 血小板抗原单克隆抗体固定法 （ＭＡＩＰＡ） ＭＡＩＰＡ测定的步骤 抗原捕获测定的优点和缺点 新的血小板抗体测定？ （１） w/o the use of mab w/o the use of whole platelets w/o any washing step 快速、敏感、特异、可靠 新的血小板抗体测定？ （２） ? 某些血小板同种异体抗体，用现有的技术 是检测不到的 漏检 anti-HPA-1a 的胎儿与母亲不相容 的疑似 ＦＮＡＩＴ 抗体检测的影响因素 ? 血小板抗原 三维结构 密度 表位 ? 血小板抗体 浓度 亲和力 异质性 ? 其他因素（比如说：配体） 血小板糖蛋白 IIb/IIIa 的构象 两种类型 HPA-1a 的同种异体抗体 抗原密度 异种表位：单克隆抗体 抗体表达的稳定性 新的血小板抗体测定方法 重组血小板抗原在 ELISA 体系中的 应用