小鼠脾脏细胞悬浮液的制备整理.docVIP

小鼠脾脏细胞悬浮液的制备 取已经免疫的小鼠，剪尾取血，并分离血清供作为阳性对照。 小鼠颈椎脱臼处死，75%乙醇浸泡5分钟，取出小鼠置于无菌操作台上，左腹侧朝上； 在小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁，可见红色长条状脾脏； 在脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露脾脏，用镊子提起脾脏，眼科剪分离脾脏下面的结缔组织，取出脾脏；放入盛有5ml 不完全培养液的培养皿中冲洗，剥去其周围的结缔组织。 A、梳刮法：脾脏可用镊子轻轻梳刮，避免将脾脏弄成碎片，将细胞悬液吸入 离心管中，自然沉降5分钟，将悬液移至另一 离心管中，弃去较大的组织块，离心沉淀细胞； B、钢网研磨法：将脾脏放置不锈钢网（100或200目）上，用注射器针芯轻轻研压脾脏，获细胞悬液； C、酶消化法：将脾脏用镊子夹碎，加入400 u/ml胶原酶（III型）5ml/只脾脏，37度消化20分钟，用尼龙网过滤，得到单细胞悬液。 注： 1.一般6-8周龄小鼠，根据品系不同，可得5-20×107细胞/只小鼠； 2.手术器械灭菌：术前高压灭菌外，也可将手术器械泡在95%酒精的小容器中，使用前取出器械，在酒精灯上烧灼去除酒精，即可保证无菌，此法较为简便。