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2019/8/25 分子生物学原理 第十四章 基因重组与基因工程 2019/8/25 分子生物学原理 基因重组 ： genomic recombination 重组 DNA ： recombinant DNA 2019/8/25 分子生物学原理 第一节、自然界的基因重组 ? 转化： transformation ? 整合： integration ? 转导： transduction ? 转位： transposition 2019/8/25 分子生物学原理 转化 ? 转化 ： 由外来 DNA 引 起生物 类型改 变的过 程称为 转化。 细菌的转化 2019/8/25 分子生物学原理 转化 ? 病毒癌基因 感染宿主细 胞后，可整 合到宿主染 色体上，从 而使宿主细 胞癌变。 转染： 噬菌体感染宿主菌后，核酸进入菌体 内的过程。 细胞的转化 2019/8/25 分子生物学原理 整合 ? 整合： ? 噬菌体感染大肠杆菌的第一步 ? 噬菌体粘附于细胞壁上，将自身的 ? DNA 注入菌体中。 此 ? DNA 可与细菌染 色体重组，成为细菌染色体的一部分。 ? 溶原菌： 整合了噬菌体基因组的细菌。 ? 裂解： ? 噬菌体感染大肠杆菌的第二步 ? DNA 利用菌体的酶系统，复制自身及 外壳蛋白，组装成大量新 ? 噬菌体，并 将细菌涨破。 2019/8/25 分子生物学原理 整合 ? 溶原 和 裂 解 可 以相 互转 变。 2019/8/25 分子生物学原理 转导 ? 溶原菌中 ? DNA 可以原样地切离出来， 也可以把邻近的宿主 DNA 在切离时带走 一部分。后者称 转导 。 ? 带有宿主 DNA 的噬菌体称 转导噬菌体 。 ? 来源于宿主的基因称 转导基因 。 2019/8/25 分子生物学原理 转位 ? 转位 ：一个或一组基因从一处转到基因 组的另一个位置。 ? 这些游动的基因称为 转位子 ( transposon ) 。 2019/8/25 分子生物学原理 转 位 2019/8/25 分子生物学原理 第二节、基因工程 ? 基因工程 ：是用分离纯化或人工合成的 DNA 在体外与载体 DNA 结合，成为重组 DNA ，用以转化宿主，筛选出能表达重 组 DNA 的活细胞，加以纯化、传代、扩 增，成为 克隆 。也叫 基因克隆 或 重组 DNA 技术 。 ? 分子水平上操作，细胞水平上表达。 ? 赋予重组 DNA 以新的生命力。 2019/8/25 分子生物学原理 基因工程 肿瘤细胞的转移与细胞表面的糖链类型有关， 而后者又与糖基转移酶的表达相关。 已经证实 GnT- Ⅴ 与转移有关。 转入 GnT- Ⅴ基因 肝癌细胞株 SMMC7721 观察其迁移、侵袭、粘附等生物学行为 转入反义 GnT- Ⅴ基因 转移 ? 转移 ? 2019/8/25 分子生物学原理 基因克隆 分 切 接 转 筛 2019/8/25 分子生物学原理 载体和目的基因 ? 载体 ： vector 在宿主细胞内可独立复制的完整 DNA 分 子。但必须利用宿主的酶系统，才能有 进一步的基因表达能力。 ? 常用的载体有： 质粒、 ? 噬菌体 、 M13 噬菌体 逆转录病毒 DNA 、昆虫病毒 DNA ? 载体与宿主共培育可大量生成，经纯化 后可用于基因工程。 2019/8/25 分子生物学原理 质粒 ? 质粒 ： plasmid 环形双链 DNA ，大小约为数千碱基对， 存在于大多数细菌的胞质中。 ? 拷贝数 ：每个细菌能容纳的质粒数目。 ? 质粒的性质： 易于从一个细菌转移入另一个细菌。 有两三个抗药性基因。 有一个限制性内切酶切口。 2019/8/25 分子生物学原理 质粒 ? pBR322 ： 常用的 质粒 2019/8/25 分子生物学原理 噬菌体载体 ? ? 噬菌体 、 M13 噬菌体