微波辅助反胶束体系甲烷氧化菌素拟酶催化反应研究.pdfVIP

摘要 摘要 天然过氧化物酶具有分离过程复杂，不易保存和不稳定易失活等缺点，作为具有高 过氧化物酶催化活性和良好稳定性的模拟酶可以替代天然过氧化物酶应用于食品、医药 和疾病检测等领域。反胶束体系可避免酶与周围有机溶剂直接接触，保护酶的催化活性 和稳定性。近年来已有研究表明适当的微波条件可以增强酶的催化活性。本文将具有过 氧化物酶模拟酶活性的甲烷氧化菌素-铜配合物增溶于反胶束体系中，利用微波辅助该 模拟酶催化的反应，旨在寻找增强拟酶活性的新方法。主要研究内容如下： 利用甲基弯菌 OB3b 产生的甲烷氧化菌素（Mb ）与铜配位结合合成具有过氧化物酶 活性的模拟酶 Mb-Cu，通过紫外-可见光谱分析监测 Mb-Cu 模拟酶的合成。使用阳离子 型 CTAB、阴离子型AOT 以及非离子型Brij35 三种表面活性剂制备反胶束体系。以罗丹 -4 - 明B 为探针确定了CTAB 的临界胶束浓度为310 mol/L ，Brij35 的临界胶束浓度为210 4 -4 mol/L ，AOT 的临界胶束浓度为 310 mol/L 。三种反胶束的电导率均随着含水量增加 而增大，未见转折点，体系稳定。对反胶束的粒径研究发现反胶束一旦形成并稳定后不 受时间影响。 制备阳离子型 CTAB、阴离子型 Brij35 和非离子型 AOT 三种含有模拟酶 Mb-Cu 的 反胶束进行催化反应，紫外光谱分析表明 CTAB、Brij35 和 AOT 三种反胶束都可加快模 拟酶 Mb-Cu 的催化反应。对反胶束体系中各表面活性的最适浓度与含水量进行研究研 究。在各表面活性最适浓度与含水率条件下对反应体系的 pH 、KCl 浓度和 H O 浓度方 2 2 面进行优化发现三种反胶束最优条件相同但Mb-Cu 模拟酶的拟酶活性不同，即pH 为8、 KCl 浓度为 0.03 mol/L 和 H O 浓度为 9×10-4 mol/L 时为最佳，此时阳离子型、阴离子型 2 2 -4 -4 和非离子型反胶束中模拟酶的酶活分别为 3.593×10 mol/L·s 、1.356×10 mol/L·s 、 2.176×10-4 mol/L·s 。由拟酶活性对比得出在阳离子型CTAB 反胶束中 Mb-Cu 配合物模拟 酶催化性能最好。 最后进行微波辅助下阳离子型 CTAB 反胶束体系中模拟酶 Mb-Cu 的催化反应，紫外 光谱分析表明微波进一步加快了催化反应。对反应体系的微波功率、微波时间、微波温 度进行研究，并使用响应面进行分析，结合实际操作后调整微波温度 56 ℃、微波功率 -3 500 W、反应时间为2 min ，得出模拟酶的平均活性为 5.26710 mol/L·s ，与没有微波辅 I 摘要 助相比扩大约 15 倍。表明微波对反胶束体系中模拟酶催化反应有促进作用。本方法可 用于与过氧化物酶催化反应相关的物质的快速检测。 关键词：过氧化物酶；甲烷氧化菌素；模拟酶；反胶束；微波 II Abstract