1.2 核酸的理化性质.pdf

核酸的理化性质 The Physical and Chemical Characters of Nucleic Acid 一、核酸的酸碱性质及溶解度性质 1. 核酸为多元酸，具有较强的酸性 2. 核酸溶于水，不溶于醇 二、核酸的高分子性质 1. 核酸的粘度： DNARNA dsDNA ssDNA 2. 核酸的沉降: 不同分子量、不同分子形状及构象的核酸分子 在超速离心时的沉降的速率有很大差异，这是超速 离心法提取和纯化核酸的理论基础 三、核酸的紫外吸收性质 核酸分子在波长260nm 处有强烈的吸收，是由 组成核酸的碱基的共轭双键所决定的。这一特性常用 作核酸的定性和定量分析 1. 碱基的紫外吸收光谱 2. 核酸紫外吸收的应用 1）用于DNA或RNA的定量 A260 = 1.0 相当于 50μg/ml 双链DNA(dsDNA) 40μg/ml 单链DNA (ssDNA or RNA) 20μg/ml 寡核苷酸 2 ）确定样品中核酸的纯度 纯DNA: A260/A280 = 1.8 纯RNA: A260/A280 = 2.0 四、DNA的变性和复性 一）DNA 变性(denaturation) ：在某些理化因素 作用下，DNA双链解开成两条单链的过程 二）DNA 变性的本质：双链间氢键的断裂 1. DNA变性的图解 高温或极端pH 协同性的DNA解链 2. 部分变性DNA的电镜图像 3. DNA解链时的紫外吸收变化 *增色效应(hyperchromic effect) ：DNA 变性 时其溶液A260增高的现象 4. DNA的解链曲线 解链曲线 ：连续加热DNA 的过程中以温度相对于A260 值作图，所得的曲线 解链温度(melting temperature，Tm) ：解链过 程中，A260值的变化达到最 大变化值的一半时所对应的 温度 5. 解链曲线的变化 * DNA链中G+C含量越高，解链温度就越高 二）DNA的复性 1. DNA 复性(renaturation) ：当变性条件缓慢地除去后， 两条解离的互补单链可重新配对，恢复原来的双螺 旋结构，这一现象称为DNA复性 2. 退火(annealing) ：热变性的DNA经缓慢冷却后即可 复性，这一过程称为退火 3. 减色效应：DNA复性时，其溶液A260 降低的现象 五、核酸分子杂交 1. 核酸分子杂交(hybridization) ：不同种类的DNA 单链 分子或RNA分子放在同一溶液中，只要两种单链分子 之间存在着一定程度的碱基配对关系，在适宜的条件 可以在不同的分子间形成杂化双链(heteroduplex)，这 种现象称为核酸分子杂交 2. 杂化双链可以在： 不同来