Septin9基因甲基化检测操作说明.docVIP

Septin9基因甲基化检测 3.5ml血浆+3.5ml 裂解液，涡旋混匀，RT静置10min。 加入90ul混匀磁珠、2.5ml无水乙醇，颠倒混匀5-6次，10-20rpm旋转混匀40-50min。 取下15ml离心管，置于磁力吸附架，弃上清。 加入1.5ml洗液A，涡旋重悬磁珠，转移到2.0ml离心管，置于磁力吸附架上。 吸附磁珠，弃上清；短暂离心，再次吸弃上清。 加入100ul洗脱液，涡旋混匀，80℃ 1000rpm震荡10min。 短暂离心，置于磁力吸附架，收集洗脱液至新的2.0ml离心管。（4℃可保存24h，不可冷冻） 加入150ul亚硫酸盐溶液、25ul保护液，涡旋混匀，80℃ 静置孵育40-50min。 降温震荡仪至23℃；离心管中加入1000ul洗液A，20ul磁珠，涡旋混匀，23℃1000rpm震荡40-50min。 短暂离心，置于磁力吸附架，弃上清。 加入800ul洗液A，涡旋洗涤磁珠，离心吸附弃上清； 加入800ul洗液B，涡旋洗涤磁珠，离心吸附弃上清； 加入400ul洗液B，涡旋洗涤磁珠，离心吸附弃上清； 再次离心吸附弃上清x2。 室温干燥10min。 加入60ul洗脱液，涡旋混匀，23℃1000rpm震荡10 min。 短暂离心，吸附。 PCR反应液： 每个反应配置32ulPCR反应液+1.6ulTaq酶。