第二章2种子的扩大培养2006.pptVIP

本研究发现，采用被孢霉进行 Υ 亚麻酸发酵时接种量可以明 显影响菌丝体的形态，从而影响菌体干重和 Υ 亚麻酸产量。 ? 2019/8/16/jp kc/fjgc 1 2019/8/16/jp kc/fjgc 2 2019/8/16/jp kc/fjgc 3 第五节 种子的扩大培养 种子扩大培养的目的与任务 种子制备与培养 种子质量控制 2019/8/16 种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干 燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化 后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养 , 最 终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培 养物称为种子。 种子扩大培养的概念 : 一、 二、种子扩培的目的 ? 接种量的需要 ? 菌种的驯化 ? 缩短发酵时间、保证生产水平 ? 三、 种子的要求及任务 ： ? 总量及浓度能满足要求 ? 生理状况稳定，个体与群体 ? 活力强，移种至发酵罐后，能够迅速生长 ? 无杂菌污染 四、种子制备的过程 。 实验室阶段： 不用种子罐，所用的设备为培养箱、 摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一 般都在菌种室完成，因此形象地将这些培养过程 称为实验室阶段的种子培养。 生产车间阶段 ： 种子培养在种子罐里面进行，一般 在工厂归为发酵车间管理，因此形象地称这些培 养过程为生产车间阶段 种子罐级数的确定 谷氨酸： 摇瓶 →小罐（一级种子）→二级发酵 青霉素： 小罐（一级种子 ）→中罐（二级种子）→三级发酵 制备种子逐级扩培的次数 ， 一般由菌丝体培养开 始计算发酵级数，但有时，工厂从第一级种子罐开始 计算发酵级数 ? 2019/8/16/jp kc/fjgc 13 发酵级数确定的依据 ? 级数受发酵规模、菌体生长特性、接种量的影响 ? 级数大，难控制、易染菌、易变异，管理困难，一 般 2-4 级。 ? 在发酵产品的放大中，反应级数的确定是非常重要 的一个方面 ? 1 、谷氨酸生产的种子制备 斜面菌种 → 一级种子培养 → 二级种子培养 培养基 ： 蛋白胨 1% ， 牛肉膏 1% ， 氯化钠 0.5% 琼脂 2% ， pH 7.0-7.2 培养条件 ： 32 ℃， 生长 18-24 小时 葡萄糖 2% ， 尿素 0.5% ， 玉米浆 2.5% ， K 2 HPO4 0.1% 32 ℃ 摇瓶 培养 12 小时 水解糖 2.5% ， 尿素 0.5% ， 玉米浆 2.5% ， K 2 HPO4 0.1% 32 ℃ 种子罐 培养 7-10 个小时 2 、青霉素生产的种子制备 斜面孢子 → 大米孢子 → 一级种子 → 二级种子 → 发酵 ? 培养基 ： 甘油、 葡萄糖、 蛋白胨等 培养条件 ： 25 ℃、 7 天 , 湿度 50% 大米 氮源（玉米浆） 25 ℃、 7 天， 控制湿度 葡萄糖 玉米浆 27 ℃， 40 小时 27 ℃、 10-14 小时 葡萄糖 玉米浆 ? 三 、种子培养方法 1 、表面培养法 （ surface culturing ）：是一种 好氧静置培养法。 2 、固体培养法 (solid culturing) ： 3 、液体深层培养 (liquid submerged culturing) 固体培养又分为浅盘固体培养和深层固体培养， 统称为曲法培养。它起源于我国酿造生产特有的 传统制曲技术。其最大特点是固体曲的酶活力高。 3 、液体深层培养 (liquid submerged culturing) 液体深层种子罐从罐底部通气，送入的空气 由搅拌浆叶分散成微小气泡以促进氧的溶解。这 种由罐底部通气搅拌的培养方法，相对于由气液 界面靠自然扩散使氧溶解的表面培养法来讲，称 为深层培养法。 （一）影响孢子质量因素 1 、培养基：产地、品种、加工方法、用量 四、影响种子质