大庆湿地水体中蓝藻和噬藻体的分布特征研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 噬藻体是一类能够感染蓝藻的具有双链 DNA 病毒，广泛分布于不同水生环境中，它 在调节水体中蓝藻种群的密度、多样性及生物地球化学循环起重要。近年来，噬藻体遗传 多样性、生物学特性等研究是生态学研究的热点。但对大庆湿地水体中噬藻体基因多样性 的研究鲜有报道。本研究以噬藻体中DNA 聚合酶pol 基因和磷酸盐辅助代谢基因phoH 基 因为分子标记，采用PCR 扩增-克隆-Sanger 测序技术对大庆湿地的噬藻体遗传多样性和群 落分布进行研究，揭示了大庆湿地水体中噬藻体DNA pol 基因和phoH 基因的多样性，采 用分离纯化的方法获得了大庆湿地水体中噬藻体病毒株和蓝藻类群，通过电镜技术观察了 噬藻体的形态，形态学结合分子生物学方法鉴定了可培养蓝藻的分类归属，对大庆湿地水 体中可培养噬藻体的DNA pol 基因进行了克隆测序，探究大庆湿地水体中可培养噬藻体和 环境样品中噬藻体的对应关系，高通量测序技术调查了大庆湿地水体中蓝藻类群的多样性， 为后续研究蓝藻和噬藻体多样性之间的关系提供了材料，主要结论如下： 1、以噬藻体中编码DNA 聚合酶的pol 基因为分子标记，研究噬藻体在大庆湿地水体 中的群落分布。采用简并性引物CP-DNAP-349E 和CP-DNAP-533Ra/Rb，对大庆湿地水体 中的噬藻体 pol 基因进行PCR 扩增，从3 个大庆湿地水体样品中获得了59 条噬藻体DNA pol 基因序列，经NCBI 数据库中BLASTp 比对发现这些序列的相似度为71%-99%之间。 系统进化分析发现这些序列被划分成5 个集群(Groups 1-5)，黎明湖、龙凤湿地和扎龙湿地 水体中的短尾噬藻体群落分布不同。将本研究获得的pol 基因与不同环境(海洋、稻田、湿 地沉积物) 的短尾噬藻体pol 基因通过系统发育分析，发现大庆湿地水体中存在新的pol 基 因集群。非度量多维尺度(NMDS)分析发现大庆湿地水体中的短尾噬藻体DNA pol 基因集 群与来自淡水湖泊和稻田的短尾噬藻体DNApol 基因集群亲缘关系较近，而与那些来自海 洋和沿海河口以及湿地沉积物的短尾噬藻体DNA pol 基因集群亲缘关系较远。 以磷酸盐辅助代谢基因phoH 基因为分子标记，探究噬藻体在大庆湿地的群落分布。 采用简并性引物vPhoHf/vPhoHr 从4 个大庆湿地水体样品中获得了73 条来源于细菌病毒 的phoH 基因克隆序列。系统发育分析发现，仅来自大庆湿地水体的的细菌病毒phoH 基因 序列形成了5 个新的亚群(Groups 3 f、Groups 3 g 和Groups 6 f、Groups 6 g、Groups 6 h) ， 表明大庆湿地水体中存在新的phoH 基因集群。基于非度量多维尺度(NMDS)分析发现大庆 湿地水体的细菌病毒phoH 基因集群与来自海洋和稻田的细菌病毒phoH 基因集群亲缘关 系较远，与来自湿地沉积物环境中的细菌病毒phoH 基因集群亲缘关系较近。 i 大庆湿地水体中蓝藻和噬藻体的分布特征研究 2 、采用双层平板分离纯化了大庆湿地四个地点的水样中获得 14 株以 Anabaena PCC7120 为寄主的可培养噬藻体，对其中4 株可培养噬藻体的生物学特性进行了研究，结 果发现四株噬藻体在温度高于 50℃的其活性几乎消失；在pH 7-8 之间活性最高，在紫外 光照射 3min 以上活性几乎消失。电镜观察其中十二株噬藻体为二十面体的短尾噬藻体。 在黎明湖水体以鱼腥藻(Anabaena PCC7120)为寄主的3 株噬藻体中，获得了3 条DNA pol 基因序列，系统发育地位与黎明湖水体中获得的噬藻体DNA pol 基因序列聚在一起。 3、从大庆湿地水体中采用平板划线分离方法分离蓝藻菌株，获得3 株菌株，对分离获 得的3 株蓝藻进行鉴定，基于 16s rRNA 和psbA 基因系统进化分析，结合其形态学特征， 鉴定出3 株蓝藻均为颤藻目，颤藻科，鞘丝藻属。 4 、采用高通量测序技术对大庆湿地水体中的蓝藻多样性进行了调查，LLM-Jun