端粒调控海马神经元再生在苯并[a]芘致学习记忆损伤中的作用.pdf

目 录 中文摘要 I 英文摘要 III 常用缩写词中英文对照表 VI 前 言 1 1 材料与方法 3 1.1 材料 3 1.2 实验方法 5 2 结 果 10 2.1 染毒小鼠出现学习记忆能力损伤 10 2.2 染毒后小鼠血浆中出现BPDE-DNA 加合物 11 2.3 B[a]P 染毒影响小鼠海马p53 相关信号通路蛋白表达 12 2.4 B[a]P 染毒影响相关神经细胞增殖分化 13 2.5 B[a]P 染毒加速端粒变短 14 3 讨 论 15 4 结 论 17 参考文献 18 综述 20 参考文献 23 致 谢 26 个人简历27 山西医科大学硕士学位论文 端粒调控海马神经元再生在苯并[a]芘致学习记忆损伤中的作 用 摘 要 目的： 苯并[a]芘（Benzo [a] pyrene,B[a]P ）是多环芳烃类物质中常见的环境污染物之一， 主要来源于矿物质的不完全燃烧，在环境中广泛存在，是世界卫生组织公认的致癌物 质之一，其致癌性已得到广泛研究。近些年研究发现苯并芘还具有神经毒性，可通过 加速大脑老化引起学习记忆的损伤。而研究表明，成年海马神经元再生减少是与脑老 化相关的学习记忆损害的机制之一，DNA 的损伤会抑制海马神经元的再生，而DNA 的损伤往往伴随着端粒功能的异常。苯并[a]芘暴露导致学习记忆功能损伤这一过程 涉及复杂的信号通路，本课题通过苯并[a]芘暴露干预 C57 小鼠，观察其行为学变化 及相关蛋白、基因的改变，探索苯并[a]芘致学习记忆功能损伤过程中可能的干预靶点， 为防治苯并[a]芘的神经毒性提供一定的科学依据。 方法： 1. 使用不同浓度B[a]P 染毒C57 小鼠不同时间，通过Morris 水迷宫实验检测小 鼠学习记忆能力。 2. 酶联免疫吸附实验检测小鼠血液中B[a]P-7 ，8-二氢二醇-9，10-环氧化物-DNA 加合物（BPDE-DNA ）含量。 3. 实时荧光定量PCR 实验检测小鼠相对端粒长度。 4. Western blot 实验检测小鼠海马中相关信号通路分子p53、p21 和ID 1 表达以 及神经细胞表面标记物Nestin 、βIII-tubulin 和GFAP 的表达水平。 5. 采用 GraphPad Prism 8.0 进行数据分析处理，Morris 水迷宫数据不服从正态 分布，经对数变换后进行重复测量的方差分析，均数±标准差（x±s ）表示实验结果， 单因素方差分析进行组间比较，LSD-t 检验进行两组间比较，检验水准α=0.05 。 I 山西医科大学硕士学位论文 结果： 1. 染毒组小鼠出现明显的学习记忆功能损伤：Morris 水迷宫实验显示随着B[a]P 染毒剂量的增加和染毒时间的增长，小鼠逃避潜伏期明显增加，定位航行实验中穿越 平台的次数明显减少。 2. 染毒组小鼠血液中BPDE-DNA 加合物含量与染毒剂量和时间呈正相关。 3. B[a]P 染毒可导致小鼠端粒长度缩短：实时荧光定量PCR 结果显示，染毒时 间1 月时，小鼠端粒长度并未明显缩短，随染毒时间和剂量的增加，端粒长度出现明 显缩短。 4. B[a]P 染毒可导致p53-p21 信号通路的激活，并抑制p53 下游信号分子ID 1 的 表达：western blot 实验结果显示，在B[a]P 低剂量和短时间暴露下，p53、p21 和ID 1 表达并无明显增减，随染毒时间和剂量的增加，p53 和p21 表达明显增加，而ID 1 表 达降低。 5. B[a]P 染毒对海马神经细胞的影响：神经干细胞标记物nestin 和星形胶质细胞 标记物GFAP 在染毒后表达明显增加；神经元标记物β-tubulin 在低剂量短时间B[a]P 暴露下未见明显变化，随染毒时间