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一 、多 肽 合 成 概 论 1．多肽化学合成概述： 　1963 年，R.B.Merrifield ［1］创立了将氨基酸的C 末端固定在不溶性树脂上，然后在此树脂上依 次缩合氨基酸，延长肽链、合成蛋白质的固相合成法，在固相法中，每步反应后只需简单地洗涤树脂，便 可达到纯化目的.克服了经典液相合成法中的每一步产物都需纯化的困难，为自动化合成肽奠定了基础.为 此，Merrifield 获得 1984 年诺贝尔化学奖. 　　今天，固相法得到了很大发展.除了Merrifield 所建立的 Boc 法(Boc:叔丁氧羰基)之外，又发展了 Fmoc 固相法(Fmoc:9-芴甲氧羰基).以这两种方法为基础的各种肽自动合成仪也相继出现和发展，并仍在不断得 到改造和完善. 　　Merrifield 所建立的 Boc 合成法［2］是采用TFA(三氟乙酸)可脱除的 Boc 为α-氨基保护基，侧链保 护采用苄醇类.合成时将一个 Boc－氨基酸衍生物共价交联到树脂上，用TFA 脱除 Boc，用三乙胺中和游离 的氨基末端，然后通过Dcc 活化、耦联下一个氨基酸，最终脱保护多采用 HF 法或 TFMSA(三氟甲磺酸)法. 用 Boc 法已成功地合成了许多生物大分子，如活性酶、生长因子、人工蛋白等. 多肽是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质。它是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化 合物,由多种氨基酸按照一定的排列顺序通过肽键结合而成。到现在，人们已发现和分离出一百多种存在于 人体的肽，对于多肽的研究和利用，出现了一个空前的繁荣景象。多肽的全合成不仅具有很重要的理论意 义，而且具有重要的应用价值。通过多肽全合成可以验证一个新的多肽的结构；设计新的多肽，用于研究 结构与功能的关系；为多肽生物合成反应机制提供重要信息；建立模型酶以及合成新的多肽药物等。 　多肽的化学合成技术无论是液相法还是固相法都已成熟。近几十年来，固相法合成多肽更以其省时、 省力、省料、便于计算机控制、便于普及推广的突出优势而成为肽合成的常规方法并扩展到核苷酸合成等 其它有机物领域。本文概述了固相合成的基本原理、实验过程，对其现状进行分析并展望了今后的发展趋 势。 　从 1963 年 Merrifield 发展成功了固相多肽合成方法以来，经过不断的改进和完善，到今天固相法 已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术，表现出了经典液相合成法无法比拟的优点。其基本原理是： 先将所要合成肽链的羟末端氨基酸的羟基以共价键的结构同一个不溶性的高分子树脂相连，然后以此结合 在固相载体上的氨基酸作为氨基组份经过脱去氨基保护基并同过量的活化羧基组分反应，接长肽链。重复 （缩合→洗涤→去保护→中和及洗涤→下一轮缩合）操作，达到所要合成的肽链长度，最后将肽链从树脂 上裂解下来，经过纯化等处理，即得所要的多肽。其中α-氨基用 BOC （叔丁氧羰基）保护的称为BOC 固相 合成法，α-氨基用 FMOC （9-芴甲氧羰基）保护的称为 FMOC 固相合成法， 2．固相合成的基本原理 Page 1 of 43 　多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序一般从 C 端（羧基端）向 N 端（氨基端）合 成。过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。现在多采用固相合成法，从而大大的减轻了每步 产品提纯的难度。为了防止副反应的发生，参加反应的氨基酸的侧链都是保护的。羧基端是游离的，并且 在反应之前必须活化。化学合成方法有两种，即 Fmoc 和 tBoc。由于Fmoc 比tBoc 存在很多优势，现在大 多采用 Fmoc 法合成，如图： 　　具体合成由下列几个循环组成： 　一、去保护：Fmoc 保护的柱子和单体必须用一种碱性溶剂（piperidine）去 除氨基的保护基团。 　　　二、激活和交联：下一个氨基酸的羧基被一种活化剂所活化。活化的单体与游离的氨基反应交联， 形成肽键。在此步骤使用大量的超浓度试剂驱使反应完成。循环：这两步反应反复循环直到合成完成。 　三、洗脱和脱保护：多肽从柱上洗脱下来，其保护基团被一种脱保护剂（TFA） 洗脱和脱保护。 2.1 树脂的选择及氨基酸的固定 　　将固相合成与其他技术分开来的最主要的特征是固相载体，能用于多肽合成的固相载体必须满足如下 要求：必须包含反应位点（或反应基团），以使肽链连在这些位点上，并在以后除去；必须对合成过程中 的物理和化学条件稳定；载体必须允许在不断增长