原核生物的基因表达与操作.pptxVIP

3 原核生物的基因表达与操作;;目的基因 载体;大肠杆菌表达体系;大肠杆菌表达体系优越性：;大肠杆菌中表达体系的不足：;4. 许多真核基因的蛋白质产物，都要经过 转译后的加工修饰（正确折叠和组装）， 而大多数的这类修饰作用在细菌细胞中 并不存在； 5. 细菌的蛋白酶，能够识别外来的真核基 因所表达的蛋白质分子，并把它们降解掉。;大肠杆菌表达载体;启动子;3.2 有功能的启动子的分离;报告基因（reporter gene）：特指那些编码产物可以被快速测定的功能核苷酸编码单元（半乳糖苷酶基因、碱性磷酸酶基因、萤光素酶基因、半乳糖激酶基因以及氯霉素乙酰转移酶基因等）。 追踪某种特定的DNA结构（重组质粒）是否已经导入寄主细胞、抑或是器官和组织；也可用来同任何一种目的启动子连接，因此其表达活性可作为检测启动子功能的依据。 ;;用大肠杆菌质粒pBR316筛选启动子;用pK01筛选启动子 ;检测启动子强弱的原理：;分离功能的启动子;3.3 可调控强启动子驱动的基因表达;;大肠杆菌的Lac启动子 ;大肠杆菌的trp启动子 ;Tac启动子 ;PL启动子 ;3.3.2 常用原核表达载体;融合型表达载体：----融合蛋白 非融合型表达载体：---天然完整蛋白 分泌型表达载体：----产物可跨膜分