并购重组人型腺病毒重组六邻体蛋白的纯化及免疫学研究研究生.pdfVIP

并购重组人型腺病毒重组六邻体 蛋白的纯化及免疫学研究研究生 人 3 型腺病毒重组六邻体蛋白的纯化及免疫学研究 目 录 中文摘要…………………………………………………………………………… 2 英文摘要…………………………………………………………………………… 3 文献综述…………………………………………………………………………… 4 前言………………………………………………………………………………… 13 实验材料…………………………………………………………………………… 15 实验方法…………………………………………………………………………… 21 实验结果…………………………………………………………………………… 27 讨论………………………………………………………………………………… 32 结论………………………………………………………………………………… 35 参考文献…………………………………………………………………………… 36 致谢………………………………………………………………………………… 41 个人简历…………………………………………………………………………… 42 - 2 - 中文摘 目的 腺病毒(Adenovirus,AdV)是引起人类呼吸道和消化道感染的重要病原 之一，严重威胁着人类的健康。腺病毒导致小儿肺炎，尤其是 6 个月至 2 岁的婴 幼儿腺病毒肺炎最为严重，感染主要是以 3, 5, 7 型为主,所以建立有效的防治 腺病毒感染措施意义重大。六邻体是腺病毒主要的结构蛋白，能够刺激机体产生 相应的抗体，抑制病毒体构象的改变，从而中和病毒体。本实验组已经成功克隆 并表达了重组人 3 型腺病毒六邻体 L1 、L2 亚基，本次实验旨在纯化重组六邻体 亚基蛋白，检测其抗原性、特异性及体外保护情况。方法在原核表达系统E.coli M15 中高效表达重组人3 型腺病毒六邻体蛋白。利用 Ni-NTA 琼脂糖亲和层析柱 进行蛋白纯化。用纯化的重组六邻体蛋白免疫新西兰家兔,利用免疫印迹技术检 测其血清中抗体，鉴定该蛋白的免疫原性和反应原性。利用固定病毒-稀释血清 方法进行中和实验，计算其中和抗体效价。结果　得到纯化的重组人 3 型腺病毒 六邻体蛋白，该蛋白免疫动物后产生高效价抗体,达到 1 ：1024000 ，该抗体能与 人 3 型腺病毒、含有该蛋白的重组工程菌株以及重组六邻体蛋白发生特异性的免 疫印迹反应(Western blot) ，不与E.coli M15 菌株、BSA 蛋白、柯萨奇病毒和Hela 细胞等反应，证明该重组六邻体蛋白具有良好的免疫原性和反应原性以及 3 型腺 病毒特异性。在中和实验中，该抗体可以有效地中和人３型腺病毒的感染，中和 效价为 1:800 ，结论　所获得的重组人3 型腺病毒六邻体蛋白具有良好的抗原性 和特异性,其产生的抗体具有良好的保护作用，为开发研制高效、无毒的腺病毒 人 3 型腺病毒重组六邻体蛋白的纯化及免疫学研究 基因工程疫苗奠定基础。 [关键词] 六邻体；纯化；免疫保护；中和抗体 Purification and study on the immunology of recombinant hexon of human type-3 adenovirus Abstract Object: The adenovirus one of the main pathogeny which cause respiratory tract and alimentary infection and cause more and more serious. Adenovirus can cause child pneumonia and the major infected types are type 3, 5 and 7 et al ，so to establish an effective step to prevention and cure Adenovirus infection has a significant meaning.