2010版药典黄曲霉毒素检验法[参考].pdfVIP

实用标准文案 2010 版药典 黄曲霉毒素检验法（文字版） 附录Ⅸ V 黄曲霉毒素测定法 本法系用高效液相色谱法 ( 附录Ⅵ D)侧定药材 饮片剂制剂中的黄曲霉毒素 ( 以黄曲霉毒 B1 、黄曲霉毒索 B2 、黄曲霉毒素 G1 和黄曲霉毒素 G2 总量计），除另有规定外，按下列方法测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇 - 乙腈 - 水 (10 ： 18：42) 为流动相，流速每分钟 0.8ml ；采用柱后衍生法检测。衍生溶液为 0.05% 的碘溶液 （取碘 0.5g ，加人甲醇 100ml 使溶解，用谁稀释至 1000ml 制成），衍生化泵流速每挣钟 0.3ml 衍生化温度 70 ℃；以 荧光检测器 检测，激发波长λ ex=360nm( 或 365nm），发射波长λ em=450nm。 两个相邻色谱峰的分离度应大于 1.5 。 1 混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混和标准品（黄曲霉毒 B 、黄曲霉毒索 B 、黄曲霉毒素 G 、黄曲霉毒素 G 标示浓度分别为 1.0ug/ml 、0.3ug/ml 、 1.0ug/ml 、0.3ug/ml ） 2 1 2 0.5ml ，置 10ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液 1ml，置 25ml 量瓶 中，用甲醇稀释至刻度，即得。 供试品溶液的制备 取供试品粉末约 15g （过二号筛），精密称定，加氯化钠 3g，置于 均质瓶中，精密加入 70%甲醇溶液 75ml ，高速搅拌 2 分钟（搅拌速度大于 11000 转/ 分钟），离心 5 分钟（离心速度 2500 转/ 分钟），精密量取上清液 15ml ，置 50ml 量瓶中，用水稀释至刻度，摇 匀，用微孔滤膜（ 0.45um ）滤过，量取续滤液 20.0ml ，通过免疫亲和柱（ AflaT-est@P ），流速 每分钟 3ml ，用水 20ml 洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗 脱，收集洗脱液，置 2ml 量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀。即得。 测定法 分别精密吸取上述混和对照品溶液 5ul 、10ul 、 15ul 、20ul 、25ul ，诸如 液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，另精密吸取上 述供试品溶液 20-25ul ，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲 霉毒素 B1 、黄曲霉毒索 B2 、黄曲霉毒素 G1 、黄曲霉毒素 G2 的量，计算，即得。 【附注】 （1）本实验应有相应的安全、防护措施，并不得污染环境。 （2 ）残留有黄曲霉毒素的废液或废渣的玻璃器皿，应置于专用贮存容器（装有 10%次氯酸钠溶 液）内，浸泡 24 小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗干净。 精彩文档