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分析化学 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪的组成： 主要包括输液系统、进样系统、色谱柱系统、检测系统和数据处理系统。 （一）输液系统 输液系统主要包括贮液器、高压泵、过滤器和梯度洗脱装置。高压泵 是输液系统的核心，借助高压泵使稳定流量的流动相快速通过固定相。 高效液相色谱仪 （二）进样系统 高效液相色谱仪普遍采用六通进样阀高压进样。六通进样阀具有进 样量准确、重复性好等特点。但进样阀有死体积，易引起色谱峰扩展。 装入样品 出口 进样 采样环 泵入溶剂 进色谱柱 高效液相色谱仪 （三）分离系统 色谱柱是最关键的部件，由柱管和固定相组成，用于样品分离。柱 管通常为内壁抛光的不锈钢管，形状几乎都是直形，能承受高压，对流 动相呈化学惰性。 高效液相色谱仪 （四）检测系统 1．紫外-可见光检测器 其检测原理和UV-Vis方法一样。只是采用的吸收池为微量吸收池，其光程为2～10mm, 体积约为1～10 ?L。 HPLC分析中，约有80%的物质可以在254nm或280nm处产生紫外吸收。此类检测器应用很广。 高效液相色谱仪 特点： 1.灵敏度高； 2.线形范围高； 3.流通池可做的很小（1mm ×10mm ，容积 8μL）； 4.对流动相的流速和温度变化不敏感； 5.波长可选择，易于操作；可用于梯度洗脱。 石英窗 接色谱柱 UV 光电倍增管 废液 高效液相色谱仪 2．荧光检测器 测定原理：依据某些物质吸收一定波长的紫外光后能发射出一种比吸收波长更长的光波（荧光），荧光强度与荧光物质浓度的关系服从比尔定律。 特点：灵敏度高、选择性好等。并非所有物质都能产生荧光，应用范围较窄。 高效液相色谱仪 3．示差折光检测器 一种通用检测器，依据不同性质的溶液对光具有不同折射率对组分 进行检测，测得的折光率差值与样品组分浓度成正比。只要物质的折射率 不同，就可进行检测，但检测灵敏度较低，不能用于梯度洗脱。 光源 调零 光学零 参比 样品 平面镜 透镜 光电转换 记录仪 放大器 遮光板 高效液相色谱仪 4.电化学检测器 电化学检测器是一种选择性检测器，依据组分在氧化还原过程中产生的电 流或电压变化对样品进行检测。 特点：适于测定氧化活性和还原活性物质，测定的灵敏度较高，检测限可 达10-9g/ml。 高效液相色谱仪 5. 光电二极管阵列检测器 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算 机快速处理，三维立体谱图，如图所示。 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪 6、蒸发光检测器 原理：首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发，最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。 高效液相色谱仪 优点： （1）可检测挥发性低于流动相的任何样品； （2）流动相低温雾化和蒸发，对热不稳定和挥发性化合物亦有较高灵敏度； （3）广泛的梯度和溶剂兼容性，无溶剂峰干扰； （4）辅助载气提高了检测灵敏度，保持检测池内的清洁，避免污染； （5）高精度雾化和蒸发温度控制，保证高精度检测； （6）可与任何HPLC系统连接。 四川中医药高等专科学校 汤丹丹 高效液相色谱仪 * 分析化学 *