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中药制剂的鉴别技术 -高效液相色谱法鉴别中药制剂 目录 基础知识 1 必备知识 2 拓展知识 3 高效液相色谱法(HPLC)主要是比较化合物与对照品在同一色谱条件下,供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰,对样品进行定性鉴别。 特点: 高速、高效、高灵敏度、应用广泛; 较少单独用于定性鉴别,多与含量测定结合进行; 指纹图谱鉴别正在逐渐增多。 基础知识 利用保留值作为定性参数; 利用在样品中加入对照品,通过峰值增高来确认; 利用LC-MS联用仪,通过被分离物的质谱图与谱库的谱图对比来定性; 利用二极管阵列检测器给出UV光谱与对照品相比较,结合保留时间来确认。 一、高效液相色谱鉴别法方法 必备知识 高效液相色谱仪 十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(C18) 微孔滤膜(0.45μm) 紫外检测器等 流动相(甲醇-水、乙腈-水等) 二、仪器与试剂 必备知识 开机前准备:根据需要选择合适的色谱柱,在容器中放入已滤过脱气好的流动相,把吸滤头放入容器中 开机:打开仪器的电源开关,仪器自检通过后,打开色谱工作站 设置仪器参数 样品分析与数据采集:待色谱柱平衡,基线稳定后,设置好样品信息,开始样品分析与数据采集 报告输出 关机:冲洗色谱柱,排出流路中可能存有的缓冲液,并用水冲洗泵的柱塞杆;泵停止,退出工作站,关闭仪器电源,在记录本上记录使用情况 三、操作方法 必备知识 进样前,色谱柱应用流动相充分冲洗平衡,待压力基线稳定后方可进样。 流动相需经脱气用微孔滤膜(0.45μm)滤过,才可使用,打开冲洗键进行泵排气。 测试溶液需用微孔滤膜(0.45μm)滤过。 使用键合硅胶柱,流动相的pH应控制在2~8,否则色谱柱易损坏。 操作完毕,应先后用水和甲醇充分冲洗液路系统,尤其是使用了含盐的流动相,更应充分冲洗。 四、注意事项 必备知识 比较供试品与对照品色谱图,供试品呈现与对照品保留时间相同的色谱峰,则判断为符合药品标准规定。 五、检验记录与结果判断 必备知识 液相色谱鉴别法实例: 四君子丸中甘草酸和六味地黄丸中芍药苷的鉴别 甘草酸HPLC图 芍药苷HPLC图 拓展知识
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