猪流行性腹泻PEDV亚单位疫苗表达流程卡.docVIP

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2020-08-28 发布于河北
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猪流行性腹泻PEDV亚单位疫苗表达流程卡.doc

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项目名称+实验步骤编号 2016PEDV-0101-DC 试验名称 pet28a -PEDV-epitopes 试验类型 ?预实验 ?对照试验 ?产品研发试验 ?替补试验 ? 复核试验目的意义原核表达线性表位抗原，配合酵母，杆状病毒表达的蓝耳非线性表位抗原，混合配苗使用研究内容构建表达载体，表达蓝耳线性表位抗原，用于动物评价技术路线摇瓶表达，SDS检测、WB检测提质粒，酶切鉴定后，送测序质粒pet28a-PEDV-epitopesSolutionⅠ连接，转化质粒pet28aPEDV基因片段（1557 bp）BamHⅠ、HindⅢ合成的PEDV 摇瓶表达，SDS检测、WB检测提质粒，酶切鉴定后，送测序质粒pet28a-PEDV-epitopes SolutionⅠ连接，转化质粒pet28a PEDV基因片段（1557 bp） BamHⅠ、HindⅢ 合成的PEDV pet28a -PEDV-epitopes BamHⅠ BamHⅠ、HindⅢ pet28a载体片段（5172 pet28a载体片段（5172 bp）人员安排进度安排内容时间表达载体构建，测序验证 2016年9月15日-9月22日蓝耳预表达，可溶性检测 2016年9月22日-9月25日蛋白纯化（5mg左右纯度90%以上的目的蛋白） 2016年9月25日-2016年9月31日试验材料质粒pet28a (武汉实验室) 合成的PEDV-puc57 限制性内切酶BamHⅠ、HindⅢ 连接酶SolutionⅠ 大肠杆菌菌株：DH5α，BL21(DE3) 合成的puc-57-PEDV epitopes经过BamHⅠ、HindⅢ双酶切后与线性载体连接 Cgcggatccggcggtggcagcgccaaatttgttgccgcatggaccctgaaagccgcagcaggtggcggcagtgcacaggttatcaacaccaacagcctgagcctgctgacccagaacaatttaaataaaagccaaagtgcactgggtaccgccatcgaacgtctgagcagcggcctgcgcatcaacagcgccaaagacgatgcagccggtcaggccatcgccaatcgctttaccgccaatattaagggcctgacacaggcaagccgcaatgccaatgatggcatcagcattgcacagacaacagagggcgcactgaacgaaatcaacaacaacctgcagcgtgttcgcgaactggccgttcagagcgccaacagcacaaacagccagagcgatctggatagcattcaggccgaaatcacccagcgcctgaatgaaatcgaccgtgtgagcggccaaacccagttcaacggcgttaaggttctggcccaggataacaccctgaccatccaagttggcgccaacgacggcgagaccatcgacatcgacctgaagcagatcaacagccaaaccctgggcggtgcacctgttgatccggcaagcccgtggaccgaaaatccgctgcagaaaatcgatgccgccttagcacaggtggatgcactgcgtagcgacctgggcgcagttcagaatcgcttcaacagtgccatcaccaacctgggcaataccgttaataacttaagcgaagcccgcagccgcattgaggatagcgactatgccaccgaggtgagtaacatgagccgtgcccagattctgcagcaggcaggcacaagcgttctggcccaagcaaatcaggtgccgcagaatgtgctgagtctgttacgcggtggcggcagcctcgaggtgaccctgccgagtttcaatgaccatagctttgtgaatattaccgttagcgcctcttttggcggtcatagcggtgccaacctgatcgccagcgacaccaccatcaacggtttcagcagcttttgcgtggatacccgccagtttaccatcagcctgttctacaatgttaccaatagctatggttatgtgagcaaaagccaggatagtaactgcccgttcaccctgcagagtgtgaatgactacctgagctttagcaagttctgtgtgagcaccagtctgctggccagcgcctgcacaatcgacctgtttggttacccggaattcggcagcggcgtgaaattt