实时荧光定量PCR技术全面剖析精品.pptVIP

实时定量PCR技术 目录 实时定量PCR基本原理 实时定量PCR的实验设计和数据处理 实时定量PCR两种相对定量方法比较 实时定量PCR实验实例分析 实时定量PCR常见故障排查 实时定量PCR的新应用 实时定量PCR基本原理 常规ⅴs实时 常规PCR:借助电泳对扩增反应的终产物进行半定 量及定性分析 定量PCR技术:利用荧光信号的变化实时检测PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,最终精 确的对起始模板的定量分析 7,10112 常规vs实时 优缺点比较 定量PCR 常规PCR 灵敏度高 只能进行半定量或定性 高精确度 分析 安全省时 不安全易污染 费时费力 定量PCR三个基本概念 扩增曲线 背景期 指数增 线性增长期 阈值与C(t)值 °阈值:是循环开始3~15个循环的荧光信号的标准偏差的 10倍,设定在扩增曲线指数增长期 ·C(t)值:荧光信号(扩增产物)到达阈值时所经过的扩增 循环次数 c(t valu c value 18.12十/-0.04 Threshold line 定量PCR的数学原理 理想的PCR反应: Xn=x0×2n n:扩增反应的循环次数 非理想的PCR反应 Xn:第n次循环后的产物量 X=Xo(1+Ex) X:初始模板量 方程式两边同时取对数得: Ex:扩增效率 log X,=log (Xo(1+Ex) 整理方程式得: log Xo=