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第二章双波长分光光度法与导数光谱法  单波长分光光度法 物质对紫 外-可见 辐射有选—分光光度法 择的吸收  单波长双光束分光光度计原理 把来自单色器的单色光,通过旋转镜和 双光束原理反光镜转变为分时空交替照射到参比光 分光光 度计 路和样品光路的两光束,然后这两光束 又分时交替地照射到同一检测器上. 把来自光源的光束经单色器色散后,分离出所需要的单色光( 经反射镜M)分解为两束强度相同的光束(L,分别通过样品池 (S)和参比池(R)后成为I和2,这两束光在平面反射镜M3和M4 的作用下,重新汇合为同一方向后投射到光电倍增管上  单波长双光東分光光度计原理示意图 调制器 M1′R ) A 光源 M2 M 4光电倍增管 r:)入 单波长双光束分光光度计原理示意图 M4、H具有相同透光孔和反射镜面,由调制器带动同步转动; H2、H平面反射镜,R参比池;S样品泡。  单波长分光光度法定量分析的理论基础 参比光路:A2=1og(I0/I1)=abco 样品光路:Alog(I/I5)=abc 输出信号为:△AAA2-1og(/I)-ab△c式中 b-吸收池长度(cm) a吸收系数,与波长有关 Co-参比液中试剂空白 Cs试样溶液中含待测物浓度  传统的单波长分光光度法的局限性 单波长分光光度法 多组分的测定(光谱相互重叠相互干扰) 2复杂样品(参比难寻) 3测定混合样品中低含量的组分 双波长分光光度法  双波长分光光度法的工作原理 小(吸收池 原理:从光源发射出来的光 束,分别经过两个可调节的 光源光栅斩光器 光电倍单色器得到两束不同波长 增管的单色光利用斩光器,使两 束光分别交替地照射到同 个吸收池上,然后光电倍增 A 管交替地接收到通过样品池 的信号,再经过电子线路装 置转换为它们的吸光度差  设开始时使交替照射的两道单色光入1(为参比波长)和入2(测量 波长)的强度都为那么在处有关系式: A=-lo a bc+a 在久,处有关系式 og bCtA 上式中ax1,a2为待测物在λ1和入,的吸收系数 As,A为光散射或背景吸收 log(L2/=A22-AxI=AA(a,2-a,bc+(A -As)  如果选择合适的波长使AsAs,通过吸收池的两道光束 的光信号差 =A2-A1=△A △A=(ax2-a  双波长测定方法-(1)等吸收点法 等吸收点:指在某一波长上的吸光度 不随浓度的变化而发生改变 如果吸光物质在不同浓度的吸收曲线 有若干个等吸收点,可以选择其中 入k2 个等吸收点处的波长作为参比波长 (λ1),与吸收物质的吸收峰波长 (入2)组合 左图是用羧基偶氮胂测定镝时,由吸 收曲线确定合适的波长对(^1 n%6邰Am=590m,x2=660nm) 吸收线1-5分别含镝1,2,3,4,5u