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AKTA explorer 100色谱系统工作流程 * * HPLC * HPLC * AIEX Technique Ultrafiltration UF Superdex 200 p.g. GF Purification factor Q Sepharose FF 10 times purification 82% yield Phenyl Sepharose HP HIC Y.-F. Liao et al. (1996) J. Biol. Chem. 271, 28348 63 622 719 Purification of recombinant a-mannosidase from Pichia pastoris * 多肽的分离纯化 * 蛋白的纯化 * * * Technique Ppt HIC AIEX CIEX AC Purification factor 7 20 2408 18647 Porcine cerebella homogenate RESOURCE Q Ammonium sulfate precipitation Butyl Sepharose Fast Flow RESOURCE s HiTrap Heparin G Protein Receptor Kinase Purification * Rec a-Mannosidase Purification from Pichia Technique Purification factor 63 622 719 UF GF AIEX HIC Phenyl Sepharose HP Q Sepharose FF Superdex 200 pg Ultrafiltration * DNA Binding Protein Purification Technique DNA-1 Sepharose CIEX AC AC AC CIEX Purification factor 5 8 4943 9 2447 HeLa cell nuclear extracts SP Sepharose High Performance Heparin Sepharose Fast Flow DNA-2 Sepharose Mono S * 思考题 什么是色谱分离技术？ 色谱分离技术的分类？常用的蛋白质分离方法有哪些？并简述其原理. 什么是色谱柱的理论塔板数以及如何计算理论塔板数？ 什么是吸附色谱及其分类和基本原理？ 什么是分配色谱？ 简述高效液相色谱的工作原理？ * 离子交换色谱的分类及应用 凝胶色谱的分离原理及分类 离子交换及疏水作用色谱的原理 高效液相色谱的分离原理及应用？ 共价色谱的工作原理？ * * * * * 问题： 1、珍珠港事件 蛋白流失，感染 2、急性肾炎 蛋白流失 3)、洗脱方法 降低离子强度 增加|pH – pI| [乙二醇] or [I-] [表面活性剂] 4)、富集效应 I+dI I mi * 分离效率和柱效 1st 分离效率 2nd 柱效 3rd 降低颗粒大小的极端重要性 * Applications * 特点： 1st互补工具：HIC主要用于蛋白质类分离纯化，虽然HIC不如IEC的应用广泛，但可以作为IEC的互补工具。如方法得当，HIC与IEC的分离效率相当。 2nd 与盐析衔接：由于在高浓度盐溶液中疏水性较大，因此HIC可直接分离盐析后的蛋白质溶液。 3rd 可以通过调节疏水性配基链长和密度来控制吸附性能的大小，因此可根据目标产物的性质选择适当的吸附剂。 4th 疏水
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