11植物脱毒技术.pptVIP

11 植物脱毒技术 为什么要培育脱毒苗？ 由病毒引起植物产量和品质退化的事例甚 多。大多数园艺植物都受到一种或几种病毒侵 染，且带毒株率高。病毒对寄主植物可造成毁 灭性危害 , 导致大幅度减产 , 甚至全株死亡。潜 隐性病毒侵染植物造成症状不明显的慢性危害， 不易被发现，尤其危险。受病毒侵染的植物全 身终身带毒，目前尚无有效药物可以治愈。利 用植物茎尖等方法脱毒，培育无病毒苗，是解 决病毒危害的有效途径。 什么叫无病毒苗？ “ 无病毒苗” —— 是指不含该种植物的主要 危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存 在表现阴性反应的苗木 。要脱除植物体内所 有病毒包括未知病毒是不可能的，准确地说 “无病毒苗”是指“特定无病毒”，也称 “检定苗”。对被病毒侵染的植物优良品种 的植株进行脱毒，培育出无病毒母株，并在 不受再侵染的条件下无性繁殖，是获得无病 毒苗的根本途径 。 烟草黄瓜花叶病毒“脉坏死症” 这 是 感 染 病 毒 病 的 郁 金 香 第一节 茎尖培养脱毒 一、病毒在植物体内的分布如何 病毒侵染到植株的叶片后 , 经过一段时间 , 即向 附近细胞增殖转移 , 转移速度很慢 , 每小时只有几微 米 . 当叶片内病毒浓度增大到一定量时 , 就转移到韧 皮部 , 随后通过维管束转移到其他部分。 由于植株生长点附近病毒的浓度很低，甚至没 有。所以，应用茎尖培养脱毒研究获得成功。由于 茎尖培养脱毒效果好，后代遗传性稳定，所以是目 前生产上最常用的脱毒措施。 为什么茎尖培养能够除去病毒？ ? 一是病毒运转速度慢。 ? 二是茎尖分生组织没有维管束，病毒只能通 过胞间连丝传递，赶不上细胞分裂和生长的 速度，所以生长点的病毒数量极少，几乎测 不出来。 进行茎尖培养时，切取茎尖越小，带 有病毒的可能性越小，但太小不易成活。 不同种类的植物和不同病毒，切取茎尖的 大小也不相同。 如马铃薯 Y 病毒，切取茎尖长度 1.0- 3.0mm, 马铃薯 X 病毒，切取茎尖长度 0.2- 0.5mm 茎尖培养，除可除去病毒外，尚可 除去其他病原体。 二、无病毒苗的获得 （一）茎尖剥离 取幼苗茎尖 2-3cm 小段，剥去可见大叶，放在 烧杯内，用自来水冲洗 1 小时左右，移入无菌室进 行严格消毒，先用 75% 酒精快速浸泡一下，再放入 5% 的漂白粉溶液内消毒 7-10min, 然后用无菌水冲洗 3-4 次。在双筒解剖镜下剥去幼叶，最后露出圆滑 的生长点，用注射的针头侧刃或自制的解剖针，仔 细地切取带有 1-2 个叶原基的生长点，随即接种到 三角瓶内的 培养基上进行培养，这样的外植体（生 长锥带 1-2 个叶原基）的培养，严格地说， 应称为分生组织培养。以上操作必须在 无菌条件下进行。 （二）培养 常用 MS 或 White 培养基。在培养基中 可酌情加 5%-10% 椰乳， 0.1-1.0mg/L 的 IAA 、 NAA 、 6-BA 等，有的还要加活性炭。 （三）提高脱毒效果 切取茎尖进行组培前，进行预处理，可 以提高脱毒效果。 1. 高温处理 又称温热疗法。某些病 毒受热以后，不稳定，失去活性，病毒部分 或全部钝化。 3. 化学处理 又称化学疗法。嘌呤、 嘧啶、氨基酸、抗生素处理，可在某种程度 上抑制植物体内或离体叶片内病毒的合成。 但不能使病毒失活。近年来发现三氮唑核苷 用于防治一系列动物 DNA 和 RNA 病毒，对植物 也有效。 第二节 其他途径脱毒 一、愈伤组织脱毒 在受感染的组织形成的愈伤组织中，并 非所有的细胞都均匀一致地带有该种病原。 在用机械方法由受烟草花叶病毒（ TMV ）侵 染的烟草愈伤组织中分离出来的单个细胞中， 只有 40% 带有这种病毒。由受侵染的愈伤组 织中能再生出很多不含有 TMV 的植株。 二、珠心胚培养脱毒 柑桔类多胚品种中除一个受精胚以外， 尚有多个由珠心细胞形成的无性胚，称为珠 心胚。珠心胚与维管束系统无联系，因此， 由珠心胚产生的植株全部为无病毒。但珠心 胚大多是不育的，必须分离培养才能发育成 正常的幼苗。珠心胚培养技术对除去柑桔主 要病毒十分有效。 三、微尖嫁接脱毒 微尖嫁接技术，指在人工培养基上培养实生砧 木，嫁接无病毒茎尖（ 0.14-1.0mm, 带 3-4 叶原基） 以培养脱毒苗的技术。这一方法适用于茎尖培养脱 毒生根困难，不能形成完整植株的植物，如柑桔、 桃、苹果等。茎尖来源包括成年无病毒植株的茎尖、 热处理或温室培养植株的茎尖以及脱毒试管苗茎尖 等。以热处理植株茎尖嫁接应用最广泛。 四、花药培养脱毒 一、植物病毒症状检测（目测法） 症状是诊断病毒的主要依据。根据植物体的生 长状况，随时观察植株茎、叶、芽是否出现该种病 毒所特有的可见症状，这也是最简单、最直接的测 定方法。但是，由于可见症状可能要经过