用异硫氰酸苯酯.docVIP

用 \o 异硫氰酸苯酯 异硫氰酸苯酯（ \o 异硫氰酸酯 PITC）与待分析多肽的N-端 \o 氨基 氨基在碱性条件下反应，生成苯氨基硫代甲酰胺（PTC）的衍生物，然后用酸处理，关环，肽链N-端被选择性地切断，得到N-端氨基酸残基的 \o 噻唑啉 噻唑啉酮苯胺衍生物。接着用有机溶剂将该衍生物萃取出来，酸作用下，该衍生物不稳定，会继续反应，形成一个稳定的苯基 \o 乙内酰硫脲 乙内酰硫脲（PTH）衍生物。余下肽链中的 \o 酰胺 酰胺键不受影响。通过用 \o HPLC HPLC或 \o 电泳 电泳法分析生成的苯乙内酰硫脲（PTH-氨基酸），可以鉴定出是哪一个氨基酸。每反应一次，结果是得到一个去掉N-端氨基酸残基的多肽，剩下的肽链可以进入下一个循环，继续发生降解。 以上方法已经可以自动化。 [2]用根据此原理设计出的自动分析仪进行分析时，能够可靠地测定肽链的30个左右氨基酸残基序列，最多可以分析50-60个氨基酸残基。在最好的条件下，每形成一次PTH-氨基酸，效率可保持在99%以上。而且此法用量少，一般只用10-100 \o 皮可 皮 \o 摩尔 摩尔的多肽即可测定氨基酸序列。对于肽链较长的多肽，可以先将肽链切断成多个小肽，对这些小肽进行氨基酸分析，然后将这些信息拼接起来，得到起始肽链中的氨基酸序列。 由于Edman降解是以化学试剂对N-端氨基的修饰为基础的，因此当N-端被其他化学基团所封闭时，就需要先去除这些基团，然后才能进行测序。此外，蛋白质中含有 \o 半胱氨酸 半胱氨酸残基时，有时两个半胱氨酸残基会发生 \o 二硫键 二硫键交联。这种情况下，需要先用 \o 过酸 过酸将二硫键氧化为 \o 磺酸 –SO3H，然后才能用Edman降解测定序列。