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人民卫生出版社 免疫学检验 人民卫生出版社 第十九章 放射免疫技术 人民卫生出版社 1. 放射免疫技术的基本概念及类型 2. 放射标记物的鉴定与纯化。 3. RIA 和 IRMA 的测定原理及关键技术。 4. RIA 和 IRMA 的临床应用与评价 本章要点 人民卫生出版社 目 录 放射性核素和放射性标记物的制备 1 放射免疫分析性 2 免疫放射分析 3 人民卫生出版社 ? 放射免疫技术 是将放射性核素高敏感的示踪特点 和抗原抗体反应的高特异性特点相结合的一种体 外测定超微量物质的新技术。 ? 其基本模式是应用放射性核素标记抗原或抗体， 通过免疫反应进行定量测定。 ? 具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试 剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，在医 学检验中得到了广泛应用。 ? 放射免疫技术根据其方法学原理的不同主要有两 种类型： RIA 和 IRMA 。 前 言 人民卫生出版社 第一节 放射性核素和放射性标记物的制备 ? 放射性核素作为放射性免疫技术的标记物， 选择何种放射性核素以及如何制备放射标 记物（将放射性核素与抗原或抗体连接）， 是建立放射免疫技术的基础。 人民卫生出版社 一、 放射性核素的基本知识 ? 基本概念 指在自然条件下可发生自发性的转化，由一种 放射性核素转变成另一种放射性核素，并同时 释放射线（α、β、γ），又称为放射性衰变。 ? 基本类型 依据其衰变方式 α衰变、β衰变、γ衰变 最常用的放射性核素是 125 I 人民卫生出版社 125 I 的优点 ? 化学性质比较活泼，标记方法简单，且容易获得 高比活性的标记物； ? 在衰变过程中产生γ射线，便于测量且效率高； ? 半衰期适中（ 60 天左右），且废弃物较容易处理。 125 I 的缺点 ? 用 125 I 取代 H ，可能使原物质免疫活性受到影响； ? 易因发生辐射损伤而使标记抗原变性； ? 作为商品化试剂的产品货架期较短。 人民卫生出版社 放射性核素放射活性的检测 利用射线照射闪烁体（ NaI 晶体），导致晶体 分子激发，在退激发时，闪烁体发出一定波长 的荧光；再由光电倍增管将极微弱的荧光转换 成光电子并放大 107 倍；从光电倍增管输出的 电信号经过放大器放大，经单道分析器甄别处 理，并在定标器上显示。 人民卫生出版社 二、 放射性核素标记抗原抗体方法 主要包括 间接标记法 直接标记法（氯胺 T 法） 人民卫生出版社 125 I - 125 I 或 125 I + 125 I- 标记物 （混合物） Ch-T 、 LPO 氧化 取代反应 （一）直接标记法 —— 氯胺 T 法（ Ch-T ） 氯胺 T 将 125 I 的 I －氧化 为 I + ， I + 取代蛋白质 酪氨酸苯环的氢，形 成稳定的放射标记物 （二碘酪氨酸），最 后加入偏重亚硫酸钠 （还原剂）终止反应。 人民卫生出版社 ? 使用无还原剂的 高比放射性碘源 ? 被标记物用量要 少 ? Ch-T 用量要低 ? 控制总反应体积 200μl ? 反应时间 1 分钟 ~ 2 分钟 ? 弱碱性反应条件 人民卫生出版社 （二）间接标记法 预先将 125 I 用 Ch-T 法标 记琥珀酰胺酯，制成的 125 I 化脂功能基团可与 蛋白分子上的氨基酸残 基反应，从而使待标记 物被碘化。 人民卫生出版社 三、 放射标记物的纯化与鉴定 （一）放射标记物的纯化 因游离的 125 I 与 125 I 标记抗原（抗 体）分子的大小 相差悬殊，故采 用凝胶层析即可 进行分离纯化 聚合、 损伤物 标记蛋白 游离 125 I 人民卫生出版社 比放射活性 ? 高比放射性 ? 高纯度 ? 完整免疫活性 放射化学纯度 ? 单位标记物 中结合于被标 记物上的放射 性占总放射性 的百分率 ? 应大于 95% 免疫活性 ? 标记物与抗体 结合的能力 ? 标记物与过量 抗体反应百分比 ? 该值越大 , 标 记物免疫活性好 （二）放射标记物的鉴定 人民卫生出版社 计算法 自身置换法 比放射活性 ? 单位化学量标记 物中所含的放射性 强度 ? 单位： Ci/g mCi/mg Ci/mmol ? 比放射性过高， 将影响标记物免疫 活性 人民卫生出版社 比放射性－计算法 结果欠准，计算简便 依据标记反应中放射性核素的利用率（标记率） 来计算标记物的比放射性 . 人民卫生出版社 比放射性－自身置换法 比较标记抗原与标准抗原的免疫活性来测定 标记物的比放射性。 作一条常规的 RIA 标准曲线，反应体系包括定 量标记抗原、不同浓度的非标记标准品抗原、 限量抗体；同时另作一条不加非标记标准品、 只加抗体和不同剂量的标记抗原的自身置换曲 线。 人民卫生出版社 自身置换曲线 标准曲线 反应平衡后，测定 B/T% 。 若从两条曲线上取一点相