促凋亡肽-阿霉素键合药制备及其抗宫颈癌研究.pdf

摘 要 doxorubicin Dox 阿霉素 （ ， ）是一种具有广谱抗肿瘤效应的抗生素，对恶性淋巴瘤、 肺癌、乳腺癌等多种肿瘤均有明显的治疗作用，但阿霉素对心脏等正常组织具有较强的毒 - Peptide-drug conjugates PDCs 性。近年来，利用多肽 药物偶联物 （ ， ）可以降低化疗药的毒 副作用、改善抗癌功效，在抗癌药研发领域引起了极大关注。到目前，已经利用细胞穿透 肽、肿瘤靶向肽、肿瘤微环境响应性多肽等多种功能肽开发出多种PDCs用于癌症治疗， KLAK 通过提高药物的靶向输送效率等提升了治疗效果。促凋亡肽 （ 肽）是一种抗肿瘤多 肽，可以通过破坏线粒体膜来诱导细胞程序性死亡。在本研究中，我们设计制备了一种基 Dox KLAK KLAK-Dox 于 和 肽的键合药 （ ），并在其中引入酸敏感释放特性，用于治疗宫 - KLAK-Dox 颈癌。探讨了促凋亡肽 阿霉素 （ ）键合药的酸响应释放特性，研究了键合药 KLAK-Dox 的肿瘤细胞内吞的情况及体内抗肿瘤效果。 KLAK KLAKLAK 本研究利用 肽 （ ） 末端半胱氨酸的巯基与马来酰亚胺功能化的阿 2 DOXO-EMCH KLAK-Dox 霉素 （ ）通过迈克尔加成反应制备键合药 ；利用质谱、红外光谱 和高效液相色谱法等对KLAK-Dox 进行表征；通过透析法研究键合药KLAK-Dox 的酸响 应性释放特性；利用激光共聚焦扫描显微镜和流式细胞仪检测KLAK-Dox 的肿瘤细胞内吞 情况；通过MTT 法和活死细胞染色法检测/ KLAK-Dox 的细胞毒性；利用阿霉素自发荧光 的特性通过CRIMaestroTM 小动物活体成像仪检测药物的体内分布；利用宫颈癌荷瘤小鼠 模型检测其体内抗肿瘤效果和毒副作用。 - KLAK-Dox pH 5.5 本研究成功制备了基于促凋亡肽 阿霉素的键合药 ，在酸性溶液 （ 80% Dox pH 7.4 10% 磷酸盐缓冲液）中释放出 以上的 ，而在 磷酸盐缓冲液中只有 的释放量； KLAK-Dox HeLa MTT 荧光成像和流式细胞仪结果显示， 能被宫颈癌细胞 （ ）快速内吞； 和活死细胞染色结果显示，键合药/ KLAK-Dox 具有更强的肿瘤细胞杀伤作用。体内实验 6h KLAK-Dox 药物分布结果显示，尾静脉给药 后，键合药 在肿瘤组织中分布显著高于小 Dox KLAK Dox+KLAK 分子阿霉素组；体内抗肿瘤结果显示，游离的 、 肽、 混合组和键