DNA琼脂糖凝胶电泳分析 .ppt

DNA琼脂糖凝胶电泳分析 DNA琼脂糖凝胶电泳分析 质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳 同组人员：黄梦秋 张如骐 肖重科 实验目的 掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的原理和方法。 实验原理 DNA分子在琼脂糖中泳动时有电荷效应和分子筛效应，但主要为分子筛效应。 在 pH 值为 8.0～8.3 时，核酸分子碱基几乎不解离，磷酸全部解离，核酸分子带负电，在电泳时向正极移动。 采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支持物，在分子筛的作用下，使分子大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大的差异，从而达到分离核酸片段检测其大小的目的。 核酸分子中嵌入荧光染料（如 EB ）后，在紫外灯下可观察到核酸片段所在的位置。 实验器材和试剂 实验器材： 桥是平板电泳槽、电泳仪、微波炉、紫外透射仪 样品： DNA分子量标准品，质粒 试剂 琼脂糖 1×电泳缓冲液（TBE） 6×上样缓冲液 溴化乙锭(EB) ：10mg/ml 上样缓冲液 0.25％溴酚兰；0.25％二甲苯青；30％甘油水溶液 作用： ①增加样品密度，使其比重增加，以确保DNA均匀沉入加样孔内 ②在电泳中形成肉眼可见的指示带，可预测核酸电泳的速度和位置 ③使样品呈色，使加样操作更方便 琼脂糖凝胶 天然琼脂（agar）:又名琼胶、菜燕、冻粉 从石花菜及其它红藻类植物提取出来的一种线状高聚物。 琼脂糖（agarose）