维生素A测定参考幻灯片.pptVIP

? 食品中维生素 D 含量较低，其他维生素严重干扰 其测定，因此测定前必须经柱层析除去干扰成分。 层析介质为硅藻土、中性氧化铝 ? 此法测定的是维生素 D 2 和维生素 D 3 的总量 31 ( 二 ) 液相色谱法 它的灵敏度较比色法高 30 倍以上，且操作简便， 精度高，分析速度快。是目前分析维生素 D 的最好方 法。 试样经皂化后，用苯提取不皂化物，蒸馏除苯， 先采用反相 C18 柱分取维生素 D ，除去大部分杂质。 进一步采用正相色谱分离，紫外检测定量。 32 ? 反相色谱条件 色谱柱： Nucleosil C18,7.5mm*300mm 流动相：乙腈＋甲醇（ 1 ＋ 1 ） 流速： 2.0 mL/min 紫外检测波长： 254nm ? 正相色谱条件 色谱柱：正相柱 Zorbax SIL,4.5mm*250mm 流动相： 0.4% 异丙酮的己烷溶液 流速： 1.6 mL/min 紫外检测波长： 254nm 33 注意事项 ? 1 、 VD 2 与 VD 3 分不开 ? 2 、皂化时加入焦性没食子酸作为抗氧化剂 ? 2 、标样与试样在同样条件下皂化，消除了 VD 的热 异化性损失。 ? 3 、也可用硅藻土及皂土柱层析，除去甾醇、 VA 、 胡萝卜素的干扰。 34 第三节 水溶性维生素的测定 水溶性维生素 B 1 、 B 2 和 C ，广泛存在于动植物组 织中，饮食来源充足。但是由于它们本身的水溶性 质，除满足人体生理、生化作用外，任何多余量都 会从小便中排出。为避免耗尽，需要经常由饮食来 提供。 35 水溶性维生素都易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿 等大多数有机溶剂。在酸性介质中很稳定，既使加热 也不破坏；但在碱性介质中不稳定，易于分解，特别 在碱性条件下加热，可大部分或全部破坏。它们易受 空气、光、热、酶、金属离子等的影响； 维生素 B 2 对光，特别是紫外线敏感，易被光 线破坏；维生素 C 对氧、铜离子敏感，易被氧化。 36 三、维生素 C 的测定 维生素 C 是一种己糖醛基酸，有抗坏血病的作用，所 以又称作抗坏血酸。维生素 C 广泛存在于植物组织中，新 鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕 猴桃、柑桔等食品中含量尤丰富。 维生素 C 具有较强的还原性，对光敏感，氧化后的产 物称为脱氢抗坏血酸，仍然具有生理活性。进一步水解 则生成 2 ， 3 - 二酮古乐糖酸，失去生理作用。 37 根据它具有的还原性质可以测定维生素 C 的含量。常用 的测定方法有 （ 1 ） 2 ， 6- 二氯靛酚法 （还原型 VC ） （ 2 ） 2 ， 4- 二硝基苯肼法 （总 VC ） （ 3 ）碘酸法 （ 4 ）碘量法 （ 5 ）荧光分光光度法 38 ( 一 ) 2 ， 6 — 二氯靛酚滴定法 1 ．原理 还原型抗坏血酸可以还原染料 2 ， 6- 二氯靛酚。该 染料在酸性溶液中呈粉红色 ( 在中性或碱性溶液中呈 蓝色 ) ，被还原后颜色消失。 还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢 抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液 还原标准染料液的量，与样品中抗坏血酸含量成正比。 39 2 、试剂 ⑴ 1% 草酸溶液：称取 10g 草酸，加水至 1000mL ； ⑵ 2% 草酸溶液：称 20g 草酸，加水至 1000mL ； ⑶ 维生素 C 标准液：准确称 20mgVC 溶于 1% 草酸中，并稀 释至 100mL ，吸 5mL 于 50mL 容量瓶中，加入 1% 草酸至刻 度，此溶液每毫升含有 0.02mgVC ； ⑷ 0.02% 2 ， 6- 二氯靛酚溶液：称取 2 ， 6- 二氯靛酚 50mg ， 溶于 200mL 含有 52mg 碳酸氢钠的热水中，冷却后，稀释 至 250mL ，过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内，应用过程 中每星期标定一次。 40 标定一 吸标液（ VC ） 5mL 于三角瓶→加 6%KI 溶液0.5mL→加 1% 淀粉 3 滴→用 0.001N KIO 3 标液滴定到淡兰色。 计算： 抗坏血酸浓度（ mg/mL ） = （ V1 × 0.088 ） /V2 V1 - 滴定时消耗 0.001N KIO 3 标液的体积（ mL ） V2 - 维生素 C 重量（ g ） 0.088 -1mL 0.001N KIO 3 标液≈维生素 C 的量（ mg/mL ） 41 标定二 吸 5mL 已知浓度 V C 标液 → 加 5mL1% 草酸 → 用染料 2 ， 6- 二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色，在 15 秒不褪色为终点 计算：每毫升 2 ， 6- 二氯靛酚相当于维生素 C 的毫克数等 于滴定度（ T ） T= （ C × V1 ） / V2 C - 维生素 C 的浓度（ mg/mL ） V1 - 维生素 C 的体