曲古抑菌素A促进食管鳞癌细胞迁移的机制研究.pdf

目 录 摘 要 1 Abstract 3 前 言 5 材料与方法 8 结果 22 讨论 25 结论 28 附图 29 参考文献 36 综述：组蛋白去乙酰化酶抑制剂在肿瘤中的研究进展 42 附录 59 攻读学位期间发表文章情况 60 致 谢 61 个人简历 63 曲古抑菌素 A 促进食管鳞癌细胞迁移的机制研究 摘 要 背景 随着医疗水平的进步，分子靶向治疗逐渐成为治疗肿瘤的新兴手段，尤其适用于 中晚期癌症患者。组蛋白去乙酰化酶（Histone deacetylase ，HDAC ）抑制剂作为一类 新型靶向抗肿瘤药物，通过抑制 HDAC 活性，促进抑癌基因转录，发挥强大抗肿瘤 功效。但是，近几年文献报道，HDAC 抑制剂具有增强肺癌、前列腺癌、乳腺癌等肿 瘤细胞迁移与侵袭能力的作用。已有研究发现 HDAC 抑制剂具有抑制食管鳞癌 （Esophageal squamous cell carcinoma ，ESCC ）细胞增殖的作用，但HDAC 抑制剂对 ESCC 细胞迁移的影响尚不明确。 目的 阐明HDAC 抑制剂曲古抑菌素 A （Trichostatin A ，TSA ）对ESCC 细胞迁移的影 响及其可能的机制，为临床抗癌药物的合理应用提供理论依据。 方法 本实验选用 KYSE-150 、EC9706 两种 ESCC 细胞系。首先，通过 Transwell 实验 检测 TSA 对 ESCC 细胞迁移能力的影响；然后，利用 Western blot 技术检测 TSA 对 上皮-间质转化（Epithelial-mesenchymal transition ，EMT ）相关标记物及组蛋白H3K9 乙酰化（H3K9Ac ）水平表达的影响；其次，通过转染小干扰 RNA Slug （Small interfering RNA Slug ，si-Slug ），利用Transwell 实验技术检测小干扰 RNA 敲低 Slug 后对 TSA 所诱导的 ESCC 细胞迁移能力的影响，利用 Western blot 技术检测 EMT 相关标记物 的表达情况；最后，通过给予细胞外调节蛋白激酶（Extracellular regulated protein kinases ，ERK ）抑制剂（U0126 、PD98059 ）、纤溶酶原激活物抑制物-1 （Plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1 ）抑制剂（PAI-039 ）以及溴结构域蛋白 4 （Bromodomain containing protein 4 ，BRD4 ）抑制剂（JQ1 ），检测不同抑制剂对TSA 诱导的 ESCC 细胞迁移能力的影响。 1 结果 TSA 明显增强ESCC 细胞的迁移能力；Western blot 实验结果表明，TSA 除了增 加组蛋白 H3K9 的乙酰化水平外，还使 E-cadherin 蛋白表达水平下调，-catenin、 Vimentin 和 Slug 蛋白表达水平上调，同时 ERK1/2 的磷酸化（p-ERK1/2 ）水平也明 显上调。通过转染 si-Slug，将 Slug 敲低，TSA 增强 E