线粒体靶向抗氧化剂对蛛网膜下腔出血细胞模型的保护作用.pdf

目录 摘 要 1 Abstract 3 前 言 6 材料与方法 8 结果 14 讨 论 18 结论 20 附图 21 参考文献 22 综述：蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的研究进展 28 附录 46 攻读学位期间发表文章情况 47 致谢 48 个人简历 49 线粒体靶向抗氧化剂对蛛网膜下腔出血细胞模型的保护作用 摘 要 背景 动脉瘤性蛛网膜下腔出血(Aneurysmal Subarachnoid Hemorrhage，aSAH) 是一种 常见的致命性疾病，约占所有脑卒中的 5.7%，每年发病率为0.7 ~ 23.9 /10 万人，但 不同地区发病率有所不同。在初次出血后，30%的患者在 1 天内死亡，尽管采用了新 治疗方法，总死亡率仍超过 50% 。此外，69%的aSAH 患者生活质量不理想。近期越 来越多的研究表明 aSAH 后早期脑损伤(Early Brain Injury，EBI)是 aSAH 患者预后不 良的主要原因。因此，EBI 治疗被认为是 SAH 患者早期重视的主要目标。维持线粒 体功能对神经细胞至关重要。最新有研究提出线粒体靶向抗氧化剂（Elamipretide TFA ， MTP-131 ）对于炎症、缺血再灌注损伤等疾病有良好的结果。但对于 SAH 后线粒体 功能障碍和线粒体凋亡途径很少被阐述。本研究将 MTP-131 应用于 SAH 后 EBI 的细 胞模型，通过线粒体功能、线粒体凋亡途径阐述MTP-131 对 SAH 后EBI 的保护作用。 目的 探讨 MTP-131 在 SAH 后早期脑损伤阶段对神经细胞的保护作用，为临床治疗提 供理论依据。 方法 采用 PC12 细胞和氧合血红蛋白（oxyhaemoglobin ，OxyHb ）建立体外 SAH 模型， 应用 MTP-131 干预，分为对照组、SAH 组、MTP-131+SAH 组。造模后 48h 为观察 点。MTT 法检测 PC12 细胞活力，荧光显微镜观察 JC -1 荧光探针染色后的线粒体膜 电位（mitochondrial membrane potential ，Δψm ）和流式细胞仪检测Δψm 变化，Western blot 检测三组 PC12 细胞胞浆、线粒体中细胞色素 c （cytochrome c ，Cyt C ）、Bcl-2 、 Bax 的表达。 结果 1.MTT 法检测 PC12 细胞活力：与对照组相比，SAH 组细胞活力明显增加。不同 1 浓度的 MTP-131 处理组，PC12 细胞活力均下降，其中 0.5μM MTP-131 组活力明显 下降（P0.01 ）。 2.荧光显微镜和流式细胞术检测 MTP-131 对 OxyHb 诱导的 PC12 细胞线粒体膜 电位的影响：荧光显微镜观察发现，对照组绿红荧光比较低；建立 SAH 模型后，绿 红荧光比明显升高（P0.05 ）；应用 MTP-131 干预后，与 SAH 组相比，绿红荧光比 明显降低（P0.05 ）。流式细胞仪定量分析绿红荧光强度，与对照组相比，SAH 的绿 红荧光比明显升高（P0.05 ）；应用 MTP-131 干预后，绿红荧光比较前明显降低 （P0.05 ）。 3.Western Blot 检测 PC12 细胞胞浆及线粒体内 Cyt C 的表达：SAH 细胞线粒体中 Cyt C ，与对照组相比，线粒体中 Cyt C 明显下