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. 课题3　分解纤维素的微生物的分离 课程标准 1.研究培养基对微生物的选择作用。 2.探讨微生物的利用。 课标解读 1.简述纤维素酶的组成及作用。 2.掌握从土壤中分离某种特定微生物的操作技术。 纤维素分解菌的筛选 复合 C1酶 Cx酶 葡萄糖苷酶 C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶 2．纤维素分解菌的筛选 (1)筛选方法： 法。 (2)筛选原理：刚果红可以与纤维素形成 ，当纤维素被 分解后，刚果红——纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现 ，我们可以通过 来筛选纤维素分解菌。 刚果红染色 红色复合物 纤维素酶 以纤维素分解菌为中心的透明圈 是否产生透明圈 [思维激活1] 纤维素分解菌的选择培养基中“选择因子”是什么？ 提示　纤维素分解菌中唯一的碳源是“纤维素粉”，唯有能利用纤维素的微生物方可在该培养基上生存，其他微生物将因缺乏碳源而无法生存，以此，可筛选到纤维素分解菌。 1．纤维素分解菌的筛选原理 即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 2．筛选过程中涉及的两种培养基 (1)纤维素分解菌的选择培养基 ①配方： 组分 含量/g 提供的主要营养 纤维素粉 5　 碳源、能源 NaNO3 1　 无机盐 Na2HPO4·7H2O 1.2 KH2PO4 0.9 MgSO4·7H2O 0.5 KCl 0.5 酵母膏 0.5 生长因子、碳源、氮源 水解酪素 0.5 氮源、生长因子 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL ②该培养基为液体培养基，利用液体选择培养基可增加纤维素分解菌的浓度。 (2)鉴别纤维素分解菌的培养基 ①配方： 组分 含量 提供的主要营养 CMC－Na 5～10 g 碳源 酵母膏 1 g 碳源、氮源、生长因子 KH2PO4 0.25 g 无机盐 琼脂 15 g 凝固剂 土豆汁 100 mL 碳源 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL ②此培养基为固体培养基——在其中加入刚果红可形成以纤维素分解菌为中心的透明圈，据此可筛选到纤维素分解菌。 【巩固1】 分析下面培养基的配方，请回答下面的问题。 纤维素分解菌的选择培养基： 纤维素粉　　　　　　 5 g NaNO3 1 g Na2HPO4·7H2O 1.2 g KH2PO4 0.9 g MgSO4·7H2O 0.5 g KCl 0.5 g 酵母膏 0.5 g 水解酪素 0.5 g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL。 (1)此培养基配方中为微生物提供碳源和氮源的分别是______、______。 (2)此配方为______培养基(根据物理状态)。 (3)此培养基选择出的微生物主要是_________________________。 解析　该培养基的唯一碳源是纤维素粉，氮源有NaNO3、酵母膏。因没有凝固剂成分，因此，该培养基从物理状态上看属于液体培养基。因该培养基仅以纤维素粉为唯一碳源，因此，可用于选择培养纤维素分解菌。 答案　(1)纤维素粉　NaNO3、酵母膏　(2)液体　(3)纤维素分解菌 1．分离纤维素分解菌的实验设计 (1)实验流程：土壤取样→ (此步可省略)→梯度稀释→将样品涂布到鉴别 的培养基上→挑选产生 的菌落。 (2)土壤取样 采集土样时，可以选择 的环境。 分离土壤中纤维素分解菌实验操作 选择培养 纤维素分解菌 透明圈 纤维素丰富 (3)选择培养 ①目的：增加纤维素分解菌的 ，确保能够从样品中分离到所需要的 。 ②选择培养：称取土样20 g，在无菌条件下加入装有30 mL培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在 上，在一定温度下振荡培养1～2 d，直至培养液变 。也可重复选择培养。 浓度 微生物 摇床 混浊 ③挑选菌落 a．刚果红染色法，挑选 的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。 b．常用的刚果红染色法包括两种，一种是先 ，再加入