死活细胞的鉴定方法.pdfVIP

活细胞的鉴定在生物学和医学上具有很重要的意义。 细胞培养过程中要随时记录 细胞的生长情况， 需要经常测定细胞的存活率； 在肿瘤细胞的研究中， 为了检验 各种药物对肿瘤细胞的杀伤力， 也需要测定肿瘤细胞的存活率。 在临床医学中死 活细胞的鉴定也有很大的应用， 例如为了检测某一男子的生育能力， 测定精子细 胞的存活力是比较常用的办法。 死活细胞的鉴定方法有很多种，常用的有染色法和仪器分析法。染色法 是常用的细胞死活鉴定方法， 简便， 易于操作。 但是通过直接的形态观察来鉴别 细胞死活，实验结果很容易受操作者的主观因素的影响， 存在一定的误差， 所以， 在实际操作中也常采用一些仪器来进行精确的批量检测。 不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理，但无论采用何种 办法，都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异。 常用的方法包括染色法和仪器分析法。 1 染色法 染色法分化学染色法和荧光染色法，根据染色机理的不同，染料或使死 细胞着色，或使活细胞着色。死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括： 死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细 胞起保护和屏障作用， 只允许物质选择性的通过； 而细胞死亡之后， 细胞膜受损， 通透性增加。常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质。 台盼蓝， 又称锥蓝， 是一种阴离子型染料， 不能透过完整的细胞膜。 所以经台盼蓝染色后 只能使死细胞着色， 而活细胞不被着色。 甲基蓝有类似的染色机理。 植物细胞的 质壁分离也可鉴定死活。 死活细胞在代谢上的差异：是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。 美蓝是一种无毒染料， 氧化型为蓝色， 还原型为无色。 由于活细胞中新陈代谢的 作用，使细胞内具有较强的还原能力， 能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原 型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色； 而死细胞或代谢缓慢的老细胞， 则因它 们的无还原能力或还原能力极弱， 使美蓝处于氧化态， 从而被染成蓝色或淡蓝色。 荧光素双醋酸酯 （FDA）是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生 质体的生活力鉴定染料，其染色机理也利用了死活细胞在代谢上的差异： FDA本 精选文库 身不产生荧光， 也无极性，能自由渗透出入完整的细胞膜。 当 FDA进入活细胞后， 被细胞内的脂酶分解， 生成有极性的、 能产生荧光的物质——荧光素， 该物质不 能自由透过活的细胞膜，积累在细胞膜内，因而使有活力的细胞产生绿色荧光； 而无活力的细胞因不能使 FDA分解，而无法产生荧光。 除此之外，还有一些细胞器的专有染料。如液泡系的专有染料中性红。 中性红是一种低毒性染料， 可以使活细胞液泡着红色， 而细胞质和细胞核不被着 色；死细胞的液泡不被着色或浅染， 染料弥散于整个细胞中， 细胞核和细胞质被 染成红色。有时侯为了增加染色效果可以将两种染料结合使用，如甲基蓝 - 中性 红混合染色法。 2 仪器分析法 可采用微电极技术（利用死活细胞膜两侧电位的差异）、全自动分析细 胞记数仪和流式细胞仪等，可对细胞的死活进行精确的批量检测。 德国 INNOVATIS出产的全自动 Cedex 细胞存活率 / 细胞计数仪 / 细胞分析 仪是 世界上第一台高分辨率、高清晰度扫描