实验三 培养基的制备与灭菌课件.pptVIP

实验三 培养基的配制、分装和灭菌 1 一、实验目的 ? 明确培养基的配制原理 ? 通过对基础培养基的配制，掌握配 制培养基的一般方法和步骤 2 培养基 是人工按一定比例配制的供微生物 生长繁殖和合成代谢产物所需要的 营养物质的混合物 培养基的原材料： 碳源、氮源、无机盐、 生长因素、水 二、基本原理 3 根据微生物的种类和实验目的不同，培养基 有不同的种类 按成分： 天然培养基，合成培养基，半合成培养基 按物理状态分： 固体培养基，半固体培养基， 液体培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 4 三、实验器材与试剂 溶液和试剂： 牛肉膏、蛋白胨、 NaCl 、琼脂 1mol/L NaOH 、 1mol/L HCl 仪器或其它用具： 三脚架、培养基分装器、 天平、牛角匙、 高压蒸汽灭菌锅等 5 称量→溶化→调 pH →过滤→分装→加塞 →包扎→灭菌→搁置斜面 四、操作步骤 6 1 ）称量 ： 按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧 杯中。 牛肉膏 可放在小烧杯或表面皿中称量， 用热 水溶解 后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随 后放人热水中，牛肉膏便会与称量纸分离，立即取 出纸片。 蛋白胨 极易吸潮，故称量时 要迅速 。 2 ）加热溶化： 在烧杯中加入少于所需要的水量， 并用玻棒 搅拌 ，待药品完全溶解后再补充水分至所需 量。若配制固体培养基，则加入 琼脂再加热 融化，此过程中需不断搅拌 ，以防琼脂糊底 或溢出，最后补足所失的水分。 7 3 ）调 pH ： 检测培养基的 pH ， 若偏酸 ，可逐滴滴加 1mol ? L -1 NaOH 边加边搅拌，并随时用 pH 试纸检测，直至达到所需 pH 范围。若 偏碱 ，则用 1mol ? L -1 HCl 进行调节。 pH 的调节通常放在 加琼脂之前 。应注意 pH 值 不要调过 头 ，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。 4 ）过滤 趁热过滤 ，固体培养基可用 4 层纱布趁热过滤，以利结 果的观察。但是供一般使用的培养基，该步可省略。 8 固体分装 5 ）分装： 披实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角 瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶 口上面造成污染 分装量： 固体培养基约为试管高度的 1 ／ 5 ，灭菌后制成斜 面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。 半固体培养基以试管高度的 1/3 为宜。灭菌后垂直 待凝 半固体 液体分装 试管 三角烧瓶 试管 三角烧瓶 1/3 1/4 1/2 1/5 1/2 9 6 ）加塞： 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花 ( 非脱脂棉 ) 制 作的棉塞。以阻止外界微生物进入培养，并保 持良好通气性 7 ）包扎： 加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸，以防 灭菌时冷凝水沾湿棉塞 8 ）灭菌： 将上述培养基以 0.103MPa ， 121 ℃ ， 20min 高压蒸气灭菌 9 ）搁置斜面： 将灭菌的试管培养基冷至 50 ℃ 左右（以防 斜面上冷凝水太多），将试管口端搁在玻 棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面 长度以不超过试管总长的一半为宜。 10 培养基分装 斜面制作 包 扎 成 捆 挂 标 签 11