免疫沉淀类试验免疫比浊.pptVIP

免疫浊度测定 微生物与免疫教研室  沉淀反应( precipita+ion) 可溶性抗原与相应抗体在适 当条件下发生特异性结合所出现 的沉淀现象。  分类 絮状沉淀试验 液体内沉淀试验环状沉淀试验 沉淀反应 免疫浊度测定 免疫扩散单向免疫扩散试验 双向免疫扩散试验 凝胶内沉淀试验 火箭免疫电泳 免疫电泳 对流免疫电泳  免疫浊度测定 概念:将现代光学测量仪器与自动化分析 检测系统相结合应用于沉淀反应,可以 对各种液体介质中的微量抗原、抗体和 药物及其他小分子半抗原物质进行定量 测定。  (一)免疫浊度分析的基本原理: 抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应,形成 小分子免疫复合物(195),在增浊剂(如聚乙 二醇(PEG)、NaF等)的作用下,迅速形成免 疫复合物微粒(195),使反应液出现浊度。 在抗体稍微过量且固定的情况下,形成的免疫 复合物量随抗原量增加而增加,反应液的浊度 亦随之增大,即待测抗原量与反应溶液的浊度 呈正相关。用一系列已知浓度的抗原标准品同 时进行试验,制备剂量反应曲线,即可计算出 标本中抗原的含量  (二)类型 1.透射免疫比浊法 线减弱的变化来衡量抗原抗体的复合物分光 通过检测光被吸收、衍射、反射和折 2、散射免疫比浊法 通过检测光折射和衍射而形成的散射光强度 来定量抗原抗体的复合物。 3、免疫胶乳比浊法 以胶乳作为载体对小分子免疫复合物进行微 量测定,进一步提高了免疫浊度测定的灵敏  滤平浑 光 透光行浊 镜片光液 透射光 B检测器A透射比浊法 散射光 检测器B散射比浊法 透射免疫比浊法和散射免疫比浊法的光路图  1透射免疫比浊法 原理: 可溶性抗原抗体在一定缓冲液中发生反应 后形成的免疫复合物,使介质浊度发生改变, 光线通过抗原抗体反应的溶液时,被其中的免 疫复合物微粒吸收,在保持抗体过量的情况下, 免疫复合物量越多,透射光越少,光线被吸收 越多,用吸光度来表示。即吸光度与免疫复合 物量呈正相关。可用抗原标准品建立标准曲线, 测出待检抗原含量。  由于免疫复合物颗粒大小再35 100nm,对近紫外的光线可见最大 吸收峰,故选择290-410nm波长测 定最佳,目前多用340nm  方法评价 优点: 缺点: 灵敏度比单扩法高5 ①抗体用量较大; 10倍 ②检测需抗原抗体反应 ②操作简便快速,1h可报达到平衡,耗时较长; 国结果准确,且能用全自动溶液中存在的抗原抗 化或半全自动化仪器进 行分析,尤其随着胶乳大 粒子增强浊度测定法的 出现,使敏感度提高 ④灵敏度较散射比浊法 其应用更加广泛。 低