免疫细胞化学技术.pptVIP

第二部分 免疫细胞化学技术 cytochemistry 组织化学技术一组化技术 o histochemistry 什么是细胞化学?检测和分析细胞的化学组成? 细胞打碎,化学成分释放。不是细胞化学技术 ★ 升么是细胞化学? 在原位检测和分析细胞的化学组成保持原有结构和位置 ★ 细胞化学技术 在保持细胞结构完整的条件下,借助细胞中 的化学反应在原位确定化学成分的分布及这些 成分的分布在细胞活动中的动态变化的技术, 用以阐明细胞化学成分、结构和功能的关系。 包括酶细胞化学技术、免疫细胞化学技术、放 射自显影技术和原位杂交等。 特点1原位:怎样做到组织/细胞的原位? 团定( Fixation) 1保持细胞、组织的固有形态和结构 2.防止细胞的自溶,以免使抗原扩散至组织间质 3细胞内蛋白质凝固 4保持组织或细胞化学成分的某些属性如抗原性或核酸杂交 活性。 方法:园定剂 Ⅰ类:醛类,甲醛,戊二醛,多聚甲醛,丙烯醛,已二醛,丙二醛等。 Ⅱ类:氧化剂类,四氧化锇(奧酸),高锰酸钾,重铬酸钾等。 Ⅲ类:蛋白变性类,甲醇,乙醇,醋酸等 Ⅳ类:其他,氯化汞,苦味酸等。 根据组织类型,选择合适的固定剂 特点2细胞化学反应及可见性 酶+底物反应 酶细胞化学技术 显色反应 抗原+抗体反应 免疫细胞化学技术 显色反应 放射性同位景衰变和射线的释放反应 感光 放射自显影 核酸杂交反应 原位杂交技术 显色凤应 细胞化学技术主要包括: 酶细胞化学技术 免疫细胞化学技术 放射自显影 原位杂交技术等 特点3细胞化学反应的观察 显微镜 流式 定性、定位分析定量分祈 细胞化学技术通用流程 组织细胞固定 石蜡包埋或冷冻 切片(保持原位) 化学反应 显色反应 学习和应用细胞化学技术应注意的方面 1技术的适用范围 2技术的基本原理 3技术的灵敏度和特异性、问题的解决 trouble shooting) 灵敏度( Sensitivity):是否有信号 特异性( Specificity):信号是否特异