实验一蛋白质的两性电离和等电点的测定.docxVIP

实验一 蛋白质的两性电离和等电点的测定 【目的】 验证蛋白质的两性电离与等电点性质。 【原理】 蛋白质由氨基酸组成。蛋白质分子除两端游离的氨基和羧基可解离外，其侧链 上的某些酸性基团或碱性基团，在一定的溶液 pH 条件下，都可解离成带负电荷或 带正电荷的基团。因此，蛋白质具有两性解离性质。当蛋白质溶液处于某一 pH 时， 蛋白质解离成阳离子和阴离子的趋势相等，既净电荷为零，成为兼性离子，此时溶 液的 pH 称为蛋白质的等电点（ isoelectric point,pI ）。蛋白质在等电点状态时溶解度 最低，容易沉淀析出。蛋白质在大于其等电点的 pH 值溶液中带负电荷；在小于其 等电点的 pH 值溶液中则带正电荷。 蛋白质在等点电以外的 pH 值溶液中， 因分子带 有同种电荷而相互排斥，不易沉淀。本实验通过观察酪蛋白在不同 pH 溶液中的溶 解度来测定其等电点。 + - + - NH NH3 NH3 2 Pr OH Pr OH Pr + + - - COOH H H COO COO （pH＜ pI ） （pH = pI ） （pH ＞ pI ） 蛋白质解离成阳离子 蛋白质成兼性离子 蛋白质解离成阴离子 【操作】 蛋白质的两性电离 取试管 1 支，按以下步骤加入各种试剂，观察现象变化并记录。 步骤 现象 5g/L 酪蛋白醋酸钠溶液 1ml，加入 0.1g/L 溴 甲酚