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高中生物选修 3 知识汇编 2010． 4 专题 1 基因工程 知识点 1． 1 DNA 重组技术的基本工具 1．基因工程：是指按照人们的意愿，进行严格的设计，通过体外  DNA 重组 和 转基因  等技 术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们的需要的新的生物类型和生物产 品。又叫做 DNA 重组技术 。 2．限制性核酸内切酶－“ 分子手术刀” （ 1）主要．．来源： 生物 （ 2）特点：能够识别 DNA 的特定的核苷酸序列 ，切开两个 之间的 （ 3） DNA 末端：包括 末端和 末端 3． DNA 连接酶－“ 分子缝合针” （ 1）作用：将 双链片断 “ 缝合” 起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的  磷酸二酯键 。 （ 2）种类及作用 ① E· coli DNA 连接酶：只能缝合 DNA的  末端 ② T4DNA连接酶：既可缝合 DNA的 末端，又可缝合 DNA的 末端。 4．基因进入受体细胞的载体－“ 分子运输车” （ 1）种类： 、 、 ；基因治疗时常用的运 载体是： （ 2）载体的特点： ①能够在宿主细胞中  ， ②有一个或多个 切割位点，便于外源 DNA的插入， ③具有 基因，供鉴定和选择。 【例题 】 1．关于限制酶的说法中正确的时  （  ） Ａ．只能识别 GAATTC的碱基序列 Ｂ． EcoRI 切割的是 G－ A 之间的氢键 Ｃ．一般不切割自身的 DNA分子，只切割外源 DNA Ｄ．它只存在于原核生物中 2． DNA连接酶的重要功能是  (  ) Ａ． DNA复制时母链和子链之间的氢键Ｂ．黏性末端碱基之间形成氢键 Ｃ．将 DNA末端之间的缝隙连接起来Ｄ．以上都不对 3．作为基因运载体，必需具备的条件之一及理由是  （  ） Ａ．能够在宿主细胞中保存下来，并大量复制，以便提供大量的目的基因 Ｂ．具有多个限制酶的切点，便于基因表达 Ｃ．具有标记基因，为目的基因表达提供条件 Ｄ．能够在宿主细胞中复制，便于筛选。 - 1 - 知识点 1．２ 基因工程的基本操作程序 1．目的基因的获取 （ 1）目的基因是指编码蛋白质的  。 注：结构基因是由非编码区和编码区组成。 非编码区的作用是调控转录能否进行， 其上有启动子 （非 编码区上游）和终止子（非编码区下游） 。原核生物的编码区是连续的，表达时全部能转录和翻译； 真核生物的编码区是不连续的，即由外显子和内含子相间排列，外显子能转录和翻译，内含子部分 转录分被剪切，不参与翻译。 （ 2）方法： ①基因文库中获取目的基因 （又叫直接分离法、 鸟枪法、 散弹射击法）：适合于原核生物的目的基因， 一般不适合于真核生物的目的基因。优点：操作简便；缺点：盲目，工作量大。 基因文库包括： 基因组文库（含有某种生物的全部基因） 和 cDNA 文库（含某种生物的部分基因） 、 ②利用 PCR技术扩增目的基因过程： ③人工合成法：核苷酸序列已知，包括反转录法和已知氨基酸序列推测法，真核生物的目的基因获 取常用此法。优点：专一性强；缺点：仅限于合成核苷酸对较少的简单基因 2．基因表达载体的构建（基因工程的核心） （ 1）目的：使目的基因在受体细胞中 稳定存在 ，并且可以 遗传给下一代 ，同时使目的基因 表达和 发挥作用 启动子： 它是 RNA 聚合酶 识别和结合的位点，驱动基因转录 mRNA 目的基因： 编码 蛋白质 （ 2）构成及作用 终止子： 终止合成 mRNA 标记基因： 鉴别受体细胞中是否含有目的基因。 3．将目的基因导入受体细胞（四个过程中唯一一步不涉及碱基互补配对原则）① 导入植物细胞： 农杆菌转化法 、基因枪法 、花粉管通道法 ② 导入动物细胞： 显微注射法③ 导入微生物细胞：大肠杆菌 4．目的基因的检测和鉴定  Ca2  感受态细胞  表达载体  转化 ① 检测目的基因：基因探针（ DNA杂交技术） ② 检测目的基因是否转录 mRNA：分子杂交技术 ③ 检测目的基因是否翻译成蛋白质：抗原与抗体结合法、个体生物学水平的鉴定 【例题 】 1．下列属于获取目的基因的方法是 （ ） ① 利用 mRNA反转录形成 ②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用 PCR技术扩增 ⑤利用 DNA转录 ⑥人工合成 Ａ．①②③⑤ Ｂ．①②⑤⑥ Ｃ．①②③④ Ｄ．①②④⑥ 2．不属于基因与运载体结合的过程是 （ ） Ａ．用一定的限制酶切割质粒暴露出黏性末端 Ｂ．用同一种限制酶切割目的基因露出黏性末端 Ｃ．将切下的目的基因插入到质粒的切口处 Ｄ．将重组的 DNA引入到受体细胞中 知识点 1．1 例题答案：